醫(yī)院感染消毒滅菌效果監(jiān)測取樣指導(dǎo)
根據(jù)《消毒技術(shù)規(guī)范》的要求，現(xiàn)將我院消毒滅菌效果監(jiān)測、環(huán)境微生學(xué)監(jiān)測的采樣方法、結(jié)果判定、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)等規(guī)范如下：
第一章 環(huán)境衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測
包括空氣、物體表面、醫(yī)務(wù)人員手的監(jiān)測
采樣及檢查原則：采樣應(yīng)具有一定數(shù)量和代表性，采樣后必須盡快對樣品按要求指標(biāo)進(jìn)行檢測，送檢時間不得﹥6小時，若樣品保存在冰箱內(nèi)送檢時間不得﹥24小時。
一、 空氣監(jiān)測：
1、 采樣時間：消毒處理后，操作前
2、 采樣方法：平板沉降法
（1）布點方法：室內(nèi)面積≤30ｍ²，設(shè)內(nèi)、中、外對角線3點，兩端距墻1米；室內(nèi)面積＞30ｍ²，設(shè)東、西、南、北4角及中央5點，其中東、西、南、北均距墻1米。
（2）采樣方法：將直徑為9cm普通營養(yǎng)瓊脂平板在室內(nèi)各采樣點處，采樣高度為距地面1.5米，采樣時將平板蓋打開，扣放于平板旁，暴露5分鐘，蓋好立即送檢。
(3)計算公式：
空氣細(xì)菌菌落總數(shù)（cfu/m³）=50000N/（A × T）
式中A為平板面積（cm2）；T為平板暴露時間（min）；N為平均菌落數(shù)（cfu）。
（4）注意事項：采樣前，關(guān)好門、窗，在無人走動的情況下，靜止10min 進(jìn)行采樣。
(5)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：
Ⅰ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/m3(或0.2cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；
Ⅱ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤200cfu/m3(或4cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格；
Ⅲ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤500cfu/m3(或10cfu/平板)，未檢出金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌為消毒合格。
二、醫(yī)務(wù)人員手的監(jiān)測：
1、 采樣時間：在接觸病人和從事醫(yī)療活動前進(jìn)行采樣或消毒后立即采樣。
2、 采樣面積及方法：手的采樣:被檢人五指并攏，用浸有含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液的棉拭子在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦 2 次(一只手涂擦面積約 30cm2)，并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去操作者手接觸部位，將棉拭子投入 10ml 含相應(yīng)中和劑的無菌洗脫液試管內(nèi)，立即送檢。
采樣面積按平方厘米計算；
采樣結(jié)果計算方法：
平板上菌落數(shù) × 稀釋倍數(shù)
細(xì)菌總數(shù)(cfu/cm2)＝────────────────
采樣面積(cm2)
3、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤5cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、銅綠假單孢菌為消毒合格。
Ⅲ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤10cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。
Ⅳ類區(qū)域工作人員：細(xì)菌總數(shù)≤15cfu/cm2，并未檢出金黃色葡萄球菌、大腸桿菌為消毒合格。
母嬰同室、嬰兒室、新生兒室及兒科病房的工作人員手上，不得檢出沙門氏菌、大腸桿菌、溶血性鏈球菌、金黃色葡萄球菌為消毒合格。
三、 物體表面監(jiān)測
1、 采樣時間:在消毒處理后進(jìn)行采樣。
2、 采樣面積：被采表面＜100/cm²，取全部表面；被采表面>100 cm²，取100 cm²。
3、 采樣方法：壓印采樣法：采用一直徑為5.6cm（面積約為25 cm²）的消毒塑料專用平皿，傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，并使培養(yǎng)基搞出平皿邊緣1-2mm,凝固后置4℃冰箱保存待用。采樣時將平皿上的瓊脂表面直接壓貼在被檢物體表面10-20秒后送檢。
置37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)24-48小時，計算并鑒定細(xì)菌。
采樣結(jié)果計算方法：
平板上菌落數(shù) × 稀釋倍數(shù)
細(xì)菌總數(shù)(cfu/cm2)＝────────────────
采樣面積(cm2)
4、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：Ⅰ、Ⅱ類區(qū)域：細(xì)菌總數(shù)≤5cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。
Ⅲ類區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)≤10cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。
Ⅳ類區(qū)域細(xì)菌：總數(shù)≤15cfu/cm2，并未檢出致病菌為消毒合格。
母嬰同室、早產(chǎn)兒室、嬰兒室、 新生兒室及兒科病房的物體表面不得檢出沙門氏菌。
第二章消毒滅菌效果監(jiān)測
一、壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測方法：
壓力蒸汽滅菌效果監(jiān)測是一組綜合措施，包括工藝監(jiān)測、化學(xué)監(jiān)測、生物監(jiān)測，各個環(huán)節(jié)缺一不可。
1、工藝監(jiān)測（又稱程序監(jiān)測）
每鍋進(jìn)行，并詳細(xì)記錄，包括滅菌設(shè)備故障檢查，滅菌溫度，滅菌時間和蒸汽質(zhì)量，滅菌物品包裝、大小擺放正確等。
2、 化學(xué)監(jiān)測法：是利用既能指示蒸汽溫度，又能指示溫度持續(xù)時間的化學(xué)指示管(卡)等在一定溫度與作用時間條件下受熱后根據(jù)顏色或性狀的變化，來判斷滅菌是否合格的方法。
（1）化學(xué)指示卡(管)監(jiān)測：
1）化學(xué)指示卡(管)監(jiān)測方法: 將既能指示蒸汽溫度，又能指示溫度持續(xù)時間的化學(xué)指示管(卡) 放入大包和難以消毒部位的物品包中央，經(jīng)一個滅菌周期后，取出指示管(卡)，根據(jù)其顏色及性狀的改變判斷是否達(dá)到滅菌條件。
2）結(jié)果判定: 檢測時，所放置的指示管(卡) 性狀或顏色均變至規(guī)定的條件，判為滅菌合格；若其中之一未達(dá)到規(guī)定的條件，則滅菌過程不合格。
（2）化學(xué)指示膠帶監(jiān)測
1）監(jiān)測方法: 將化學(xué)指示膠帶粘貼于每一待滅菌物品包外，經(jīng)一個滅菌周期后，觀察其顏色的改變，以指示是否經(jīng)過滅菌處理，而不能作為滅菌效果判定指標(biāo)。
2）結(jié)果判定: 檢測時，所放置的指示管(卡)、膠帶的性狀或顏色均變至規(guī)定的條件，判為滅菌合格；若其中之一未達(dá)到規(guī)定的條件，則滅菌過程不合格。
（3）B-D試驗：用于預(yù)真空（包括脈動真空）壓力蒸汽滅菌器冷空氣排放效果的檢測，冷空氣是造成預(yù)真空（包括脈動真空）壓力蒸汽滅菌失敗的主要因素之一。對預(yù)真空和脈動真空壓力蒸汽滅菌，每日進(jìn)行一次B-D試驗。
1）檢測方法：B-D試驗要求做前預(yù)熱、空載監(jiān)測每天一次，將B-D試紙放入標(biāo)準(zhǔn)測試包，中間包好，水平放入滅菌柜內(nèi)滅菌車的前底層，靠近柜門與排氣口底前方（上方）滅菌柜內(nèi)除測試包無任何物品。
2）結(jié)果判定:經(jīng)134℃，3.5—4分鐘后，取出B-D測試紙觀察顏色變化。若變色均勻一致，說明冷空氣排放效果良好，滅菌器可以使用。
（4）化學(xué)檢測注意事項: 監(jiān)測所用化學(xué)指示物須經(jīng)衛(wèi)生部批準(zhǔn)，并在有效期內(nèi)使用。
3、生物監(jiān)測法
1）指示菌株: 指示菌株為耐熱的嗜熱脂肪桿菌芽胞(ATCC 7953 或 SSIK 31株)，在 121℃±0.5℃條件下，D值為 1.3 min～1.9min，殺滅時間(KT值)≤19min，存活時間(ST值)為≥3.9min。
（2）檢測方法: 將壓力蒸汽滅菌生物培養(yǎng)指示劑放于標(biāo)準(zhǔn)測試包中，按照國家規(guī)范，分別將測試包放于鍋內(nèi)不同位置，滅菌完畢，取出該生物指示劑，擠破內(nèi)含的安瓿，于56℃培養(yǎng)鍋內(nèi)培養(yǎng)，48小時后閱讀結(jié)果。
3）結(jié)果判定: 每個指示劑接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基都不變色，判定為滅菌合格；指示菌片之一接種的溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基，由紫色變?yōu)辄S色時，則滅菌過程不合格。
4）注意事項: 監(jiān)測所用菌片須經(jīng)衛(wèi)生部認(rèn)可，并在有效期內(nèi)使用。生物指示物監(jiān)測應(yīng)1月1次。
4、質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：
1） 工藝監(jiān)測應(yīng)每鍋進(jìn)行。
2） 化學(xué)監(jiān)測：應(yīng)每包內(nèi)放置化學(xué)指示卡，包外貼化學(xué)指示膠帶，監(jiān)測合格方可使用。預(yù)真空和脈動真空壓力蒸汽鍋每日做B—D試驗合格后方可使用。
3） 生物監(jiān)測應(yīng)每月一次，無菌生長。
二、紫外線消毒效果的監(jiān)測
1、檢測方法: 開啟紫外線燈5min后，將指示卡置紫外燈下垂直距離1m處，有圖案一面朝上，照射1min（紫外線照射后，圖案正中光敏色塊由乳白色變成不同程度的淡紫色），觀察指示卡色塊的顏色，將其與標(biāo)準(zhǔn)色塊比較，讀出照射強度。
2、結(jié)果判定: 普通 30w 直管型紫外線燈，新燈輻照強度 ≥90μW/cm2為合格；使用中紫外線燈輻照強度≥70μW/cm2 為合格；30W 高強度紫外線新燈的輻照強度≥180μW/cm2 為合格。
3、注意事項：
1）因指示卡光敏色塊會隨時間發(fā)生變化，放置時間過久，指示卡會變淡，應(yīng)及時記錄判斷結(jié)果。
2）指示卡應(yīng)用黑色紙包裝，置4℃冰箱內(nèi)儲存，以免光敏色塊遇日光照射不穩(wěn)定變色，而影響監(jiān)測結(jié)果。
3）指示卡應(yīng)獲得衛(wèi)生部的衛(wèi)生許可批件，并在有效期內(nèi)使用。
二、使用中消毒劑與無菌物品保存液監(jiān)測
用試紙或指示卡檢測化學(xué)消毒劑含量是近年來化學(xué)消毒劑濃度簡易測定方法的新發(fā)展，它解決了醫(yī)院進(jìn)行消毒劑使用過程的濃度監(jiān)測。
1、 化學(xué)監(jiān)測：
（1）G-I型消毒劑濃度試紙：：
1） 適用于過氧乙酸及其他含氯消毒劑和含次氯酸鈉的清洗消毒劑等的監(jiān)測。
2） 使用方法：取試紙條于消毒劑溶液中，片刻取出。半分鐘內(nèi)，在自然光下與標(biāo)準(zhǔn)色塊比較，直接讀出溶液所含有效成分濃度值，時間超過1分鐘，著色逐漸消退。
（2）戊二醛濃度測試卡使用辦法：從瓶中取出一條測試卡，并旋緊瓶蓋，將指標(biāo)色塊完全浸沒于待測消毒液中，沾下瓶蓋上的紙墊，去除多余的液體，橫置于瓶蓋上等候5—8分鐘（不要將色塊面朝下，以免受到污染），觀察色塊著色變化，若指示色塊變成均勻黃色，表示溶液濃度﹥2.0%，若色塊全部或仍有部分白色，表示溶液濃度﹤2.0%；
2、 生物監(jiān)測：
1） 采樣時間：采取更換前使用中的消毒液與無菌器械保存液。
2） 采樣量及方法：在無菌條件下，用無菌吸管吸取1毫升被檢液，加入9毫升稀釋液中混勻送檢。不同的消毒劑加入相應(yīng)的中和劑，對于醇類與酚類消毒液，稀釋液用普通營養(yǎng)肉湯即可，對于含氯消毒液、含碘消毒液、過氧化物消毒液，需在肉湯中加入中和劑0.1%硫代硫酸鈉；對于氯己定（洗必泰）、季胺鹽類消毒液，許在肉湯中加入3%（w/v）吐溫80和0.3%卵磷脂；對于醛類消毒液，需在肉湯中加入0.3%甘氨酸；對于含有表面活性劑的各種復(fù)方消毒液，需在肉湯中加入3%（w/v）吐溫80，以中和被檢液的殘效作用。
3） 注意事項：
（1） 不同消毒劑使用不同的中和劑中和。
（2） 采集消毒液樣品時應(yīng)在消毒液內(nèi)沒有物品或防入物品消毒作用到規(guī)定時間之后進(jìn)行采樣。
4） 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：
（1）、使用中消毒液每季度監(jiān)測一次，細(xì)菌菌落總數(shù)應(yīng)≤100cfu/ml,不得檢出致病微生物。
（2）使用中滅菌劑每月監(jiān)測一次，應(yīng)無菌生長。
（3）無菌器械保存液必須無菌生長。
三、血液透析液監(jiān)測
1、標(biāo)本采集：透析液的采集應(yīng)采進(jìn)入透析器的透析液和離開透析器的透析液
2、監(jiān)測時間：每月對出入透析器的透析液送檢。疑有透析液污染或發(fā)生嚴(yán)重感染病時，應(yīng)增加采樣點，如原水口，反滲水出口，儲水罐出口，透析液配比機，濃縮透析液等。
懷疑或確定病人在透析中熱源反應(yīng)和菌血癥時，應(yīng)隨時監(jiān)測。
3、 控標(biāo)準(zhǔn)：透析器入口液細(xì)菌菌落總數(shù)必須≤200cfu/ml，出口液細(xì)菌菌落總數(shù)必須
≤2000cfu/ml并不得檢出致病微生物。
四、內(nèi)鏡的消毒滅菌效果監(jiān)測
1、化學(xué)監(jiān)測：含氯消毒劑、2%戊二醛等應(yīng)每日監(jiān)測，監(jiān)測方法使用中化學(xué)消毒劑監(jiān)測的化學(xué)監(jiān)測部分。
1、 生物監(jiān)測：采樣部位為內(nèi)鏡的內(nèi)腔面
采樣方法：用無菌注射器抽取10毫升含相應(yīng)中和劑的緩沖液，從待檢內(nèi)鏡活檢口注入，用15毫升無菌試管從活檢口收集，及時送檢，2小時內(nèi)檢測同時做致病菌監(jiān)測。
2、 質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)：
（1） 消毒劑濃度監(jiān)測每日定時監(jiān)測并做好記錄，保證消毒效果。消毒劑使用時間不得超過產(chǎn)品說明書規(guī)定的使用期限。
（2） 消毒后內(nèi)鏡（如胃鏡、腸鏡、喉鏡、氣管鏡、鼻竇鏡等）應(yīng)每季度進(jìn)行生物學(xué)監(jiān)測并做好監(jiān)測記錄，其合格標(biāo)準(zhǔn)為細(xì)菌總數(shù)﹤20cfu/件，不得檢出致病菌。
（3） 滅菌后內(nèi)鏡（如腹腔鏡、關(guān)節(jié)鏡、膽道鏡、膀胱鏡、胸腔鏡、腦室鏡等）應(yīng)每月進(jìn)行生物學(xué)監(jiān)測并做好記錄，合格標(biāo)準(zhǔn)為無菌生長。
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