1.藻種培養(yǎng)設(shè)施:藻種的培養(yǎng)要在保種室中進(jìn)行,保種室要求通風(fēng)條件好,光線條件好,溫度可控性好,保種室要配有空調(diào)、冰箱、具有人工光源的培養(yǎng)架等。培養(yǎng)中常用培養(yǎng)儀器有顯微鏡、解剖鏡等,容器有三角燒瓶、廣口玻璃瓶等。保種室要嚴(yán)格消毒,防止病菌的侵入。
2.容器、工具的消毒:進(jìn)行單細(xì)胞藻類的純培養(yǎng),容器、工具、培養(yǎng)基都要進(jìn)行嚴(yán)格滅菌,但一般生產(chǎn)性的單種培養(yǎng),則只須達(dá)到消毒目的就可以了。常用的消毒方法有高溫消毒法和化學(xué)藥品消毒法。
高溫消毒法是利用高溫殺死微生物的方法。不耐高溫的容器如塑料和橡膠制品等不能利用高溫法消毒。a、直接灼燒消毒 接種環(huán)、鑷子等金屬小工具,試管口、瓶口等可以直接在酒精燈火焰上短暫灼燒消毒。載玻片、小刀等則最好先蘸酒精,然后在酒精燈火焰上點(diǎn)燃,等器具上的酒精燒完,也就完成了滅菌操作。b、煮沸消毒 把容器、工具放入鍋中,加水煮沸消毒,一般煮沸10-20分鐘。大型錐形瓶消毒,可在瓶口上放一普通的玻璃漏斗,再在漏斗上放一稱量瓶蓋,在錐形瓶內(nèi)加少量淡水,置電爐上加熱煮沸5-10分鐘,可使整個瓶壁消毒。消毒完畢即用消毒的紙或消毒的紗布包扎瓶口。此法適合消毒小型的容器工具。c、烘箱干燥消毒 將玻璃容器、金屬工具用清水洗干凈后,放入烘箱。關(guān)閉烘箱門,打開通氣孔,接通電源加熱。當(dāng)溫度上升到120℃時,關(guān)閉通氣孔,停止加熱。如果進(jìn)行純培養(yǎng),容器必須滅菌,當(dāng)溫度上升到105℃時,關(guān)閉通氣孔,繼續(xù)加熱至160℃,保持溫度,恒溫2小時,然后停止加熱。必須要等到溫度下降到60℃以下,才能打開烘箱門。有棉塞和紙包扎的容器、工具滅菌,不能超過180℃,以免烘焦。
化學(xué)藥品消毒主要用于生產(chǎn)性大量培養(yǎng)中,大型容器、工具、水泥池等常用化學(xué)藥劑消毒。a、漂白粉消毒 工業(yè)用漂白粉一般含有效氯25%~35%,消毒時按萬分之1-3的含量配成水溶液,把容器、工具在溶液中浸泡半小時,再用消毒水沖洗3~4次即可。b、 酒精消毒 酒精消毒常用于中小形容器和工具,方法是用紗布蘸70%酒精在容器、工具的表面涂抹即可。c、高錳酸鉀消毒 以百分之五的比例配成溶液把要消毒的容器、工具浸泡5分鐘,然后取出用消毒水沖洗2~3次,便可達(dá)到消毒目的。如果是對玻璃鋼水槽、水泥池等消毒,可以用高錳酸鉀溶液撥在池壁上,撥灑幾遍后刷洗池底,10分鐘后再用消毒水沖洗干凈。d 石炭酸 石炭酸消毒按3%~5%的比例配成消毒液,把要消毒的容器和工具放在其中浸泡半小時,再用消毒水沖洗2~3次。
小新月菱形藻常用培養(yǎng)液配方:
NaNO3 0.08g 維生素B1 200微克
K2HPO4 0.008g 維生素B12 200納克
FeC6HO7(1%) 0.2ml 人尿 1.5ml
NaSiO3 0.02g 海水 1000ml
微藻的培養(yǎng)液是在消毒的海水或淡水中加入各種營養(yǎng)鹽配制而成。培養(yǎng)液的配制,首先按配方先后稱量各種營養(yǎng)物質(zhì),可逐一溶解,也可以同時溶解。遇到難溶的含金屬的物質(zhì)可以加熱或與NaEDTA一起溶解,配方中的維生素一般等水溫降至60℃后再加。生產(chǎn)上為了方便可以將營養(yǎng)鹽配方濃縮1000-2000倍配成母液,使用時可以根據(jù)培養(yǎng)水體多少量取母液的體積即可。
3.培養(yǎng)液的制備和消毒:保種培養(yǎng)液的消毒一般采用加熱消毒法,經(jīng)沉淀、過濾的海水,一般加溫至90℃左右維持5分鐘或達(dá)到沸騰即可。由于海水中的一些對藻類生長有促進(jìn)作用的有機(jī)物在高溫時易遭破壞,所以加溫時間不宜太長。
4.接種:接種就是把作為藻種的藻液接入新配好的培養(yǎng)液中,進(jìn)行豐富培養(yǎng)。選擇無污染、生長旺盛、顏色正常、藻液中無沉淀、細(xì)胞無附壁的藻種進(jìn)行接種。一般來說藻種液和新培養(yǎng)液的比例為1:2。接種的時間最好在上午的8~10時,這個時間是藻類細(xì)胞代謝最旺盛的時候。培養(yǎng)條件:保種的條件最好保證在藻種的最適生長條件,要保證藻種不受污染。
5.日常培養(yǎng)管理: 1)注意保種室的衛(wèi)生,定時打掃,謝絕無關(guān)人員的進(jìn)入等;2)外觀檢查。檢查藻液顏色是否不再淺變濃,或是出現(xiàn)渾濁或沉降等反映藻體生長不正常,處于老化時期受到病蟲侵染的現(xiàn)象。3)鏡檢檢查是否發(fā)生污染,是否老化,以確保試驗(yàn)的順利進(jìn)行。4)控制溫度。通過暖氣控溫裝置控制溫度,使試驗(yàn)藻細(xì)胞在15-20℃的環(huán)境中。5)搖瓶。在培養(yǎng)過程中每天搖瓶1-3次,使藻均勻分布。6) 調(diào)節(jié)光強(qiáng)。保持合適的光強(qiáng),白天避免陽光直射。
6. 藻種保藏方法:存藻種時可以根據(jù)保種目的和保種條件的不同分別采取不同的保種方法。1)固體培養(yǎng)基保存法。保種用的固體培養(yǎng)基的營養(yǎng)濃度應(yīng)比正常的液體培養(yǎng)液的高,一般增加一倍。瓊脂量為1-1.5%。固體培養(yǎng)基分裝滅菌后,冷卻待用。將無污染的藻種用噴霧法或劃線法接種到固體培養(yǎng)基上。常用固體培養(yǎng)基保種方法有兩種,一種通常把藻種接種在固體培養(yǎng)基上,在弱光低溫條件下慢慢培養(yǎng)保存,接種一次可以保存半年到一年。另一種方法,接種后首先放在光線充足的地方(防止直射光照射),使藻類細(xì)胞較快速地繁殖起來,直到培養(yǎng)基上出現(xiàn)顏色,即可放入冰箱或冷庫中,一般在5℃左右的低溫下保存。每天給藻種幾個小時的弱光照。此法保存的時間可長達(dá)2至3年。2)液體培養(yǎng)基保存法。低溫、弱光下培養(yǎng)。一般兩個月更換一次培養(yǎng)液。
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