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工業(yè)發(fā)酵中培養(yǎng)基選擇和配制的原則

     培養(yǎng)基是提供微生物生長繁殖和生物合成各種代謝產(chǎn)物所需要的、按一定比例配制的多種營養(yǎng)物質(zhì)的混合物。培養(yǎng)基組成對菌體生長繁殖、產(chǎn)物的生物合成、產(chǎn)品的分離精制乃至產(chǎn)品的質(zhì)量和產(chǎn)量都有重要的影響。微生物的營養(yǎng)活動是依靠向外界分泌大量的酶,將周圍環(huán)境中大分子蛋白質(zhì)、糖類、脂肪等營養(yǎng)物質(zhì)分解成小分子化合物,借助于細(xì)胞膜的滲透作用,吸收這些小分子營養(yǎng)物質(zhì)來實現(xiàn)的。不同的微生物的生長情況不同或合成不同的發(fā)酵產(chǎn)物時所需的培養(yǎng)基有所不同,但對于所有發(fā)酵生產(chǎn)用培養(yǎng)基的設(shè)計仍存在某些共同點可供遵循,這就是所有的發(fā)酵培養(yǎng)基都必須提供微生物生長繁殖和產(chǎn)物合成所需的碳源、氮源、無機元素、生長因子、水和氧氣等。對于大規(guī)模發(fā)酵生產(chǎn),除考慮上述微生物的需要外,還必須重視培養(yǎng)基原料的價格和來源。

  培養(yǎng)基的選擇

  不同的微生物對培養(yǎng)基的需求是不同的,因此,不同微生物培養(yǎng)過程對原料的要求也是不一樣的。應(yīng)根據(jù)具體情況,從微生物營養(yǎng)要求的特點和生產(chǎn)工藝的要求出發(fā),選擇合適的營養(yǎng)基,使之既能滿足微生物生長的需要,又能獲得高產(chǎn)的產(chǎn)品,同時也要符合增產(chǎn)節(jié)約、因地制宜的原則。

  1、根據(jù)微生物的特點選擇培養(yǎng)基

  用于大規(guī)模培養(yǎng)的微生物主要有細(xì)菌、酵母菌、霉菌和放線菌等四大類。它們對營養(yǎng)物質(zhì)的要求不盡相同,有共性也有各自的特性。在實際應(yīng)用時,要依據(jù)微生物的不同特性,來考慮培養(yǎng)基的組成,對典型的培養(yǎng)基配方需作必要的調(diào)整。

  2、根據(jù)發(fā)酵方式選擇培養(yǎng)基

  液體和固體培養(yǎng)基各有用途,也各有優(yōu)缺點。在液體培養(yǎng)基中,營養(yǎng)物質(zhì)是以溶質(zhì)狀態(tài)溶解于水中,這樣微生物就能更充分接觸和利用營養(yǎng)物質(zhì),更有利于微生物的生長和更好地積累代謝產(chǎn)物。工業(yè)上,利用液體培養(yǎng)基進(jìn)行的深層發(fā)酵具有發(fā)酵效率高,操作方便,便于機械化、自動化,降低勞動強度,占地面積小,產(chǎn)量高等優(yōu)點。所以發(fā)酵工業(yè)中大多采用液體培養(yǎng)基培養(yǎng)種子和進(jìn)行發(fā)酵,并根據(jù)微生物對氧的需求,分別作靜止或通風(fēng)培養(yǎng)。而固體培養(yǎng)基則常用于微生物菌種的保藏、分離、菌落特征鑒定、活細(xì)胞數(shù)測定等方面。此外,工業(yè)上也常用一些固體原料,如小米、大米、麩皮、馬鈴薯等直接制作成斜面或茄子瓶來培養(yǎng)霉菌、放線菌。
 

   3、從生產(chǎn)實踐和科學(xué)試驗的不同要求選擇

  生產(chǎn)過程中,由于菌種的保藏、種子的擴大培養(yǎng)到發(fā)酵生產(chǎn)等各個階段的目的和要求不同,因此,所選擇的培養(yǎng)基成分配比也應(yīng)該有所區(qū)別。一般來說,種子培養(yǎng)基主要是供微生物菌體的生長和大量增殖。為了在較短的時間內(nèi)獲得數(shù)量較多的強壯的種子細(xì)胞,種子培養(yǎng)基要求營養(yǎng)豐富、完全,氮源、維生素的比例應(yīng)較高,所用的原料也應(yīng)是易于被微生物菌體吸收利用。常用葡萄糖、硫酸銨、尿素、玉米漿、酵母膏、麥芽汁、米曲汁等作為原料配制培養(yǎng)基。而發(fā)酵培養(yǎng)基除需要維持微生物菌體的正常生長外,主要是要求合成預(yù)定的發(fā)酵產(chǎn)物,所以,發(fā)酵培養(yǎng)基碳源物質(zhì)的含量往往要高于種子培養(yǎng)基。當(dāng)然,如果產(chǎn)物是含氮物質(zhì),應(yīng)相應(yīng)地增加氮源的供應(yīng)量。除此之外,發(fā)酵培養(yǎng)基還應(yīng)考慮便于發(fā)酵操作以及不影響產(chǎn)物的提取分離和產(chǎn)品的質(zhì)量。

  4、從經(jīng)濟效益方面考慮選擇生產(chǎn)原料

  從科學(xué)的角度出發(fā),培養(yǎng)基的經(jīng)濟性通常是不被那么重視,而對于生產(chǎn)過程來講,由于配制發(fā)酵培養(yǎng)基的原料大多是糧食、油脂、蛋白質(zhì)等,且工業(yè)發(fā)酵消耗原料量大,因此,在工業(yè)發(fā)酵中選擇培養(yǎng)基原料時,除了必須考慮容易被微生物利用并滿足生產(chǎn)工藝的要求外,還應(yīng)考慮到經(jīng)濟效益,必須以價廉、來源豐富、運輸方便、就地取材以及沒有毒性等為原則選擇原料。

  培養(yǎng)基的配制原則

  培養(yǎng)基的配制必須提供合成微生物細(xì)胞和發(fā)酵產(chǎn)物的基本成分;有利于減少培養(yǎng)基原料的單耗,單位營養(yǎng)物質(zhì)所合成產(chǎn)物數(shù)量大或產(chǎn)率大;有利于提高培養(yǎng)基產(chǎn)物的濃度,以提高單位容積發(fā)酵罐的生產(chǎn)能力;有利于提高產(chǎn)物的合成速度,縮短發(fā)酵周期;盡量減少副產(chǎn)物的形成;減少對發(fā)酵過程中通氣攪拌的影響,有利于提高氧的利用率、降低能耗;有利于產(chǎn)品的分離和純化;并盡可能減少產(chǎn)生“三廢”的物質(zhì)。

  當(dāng)然,設(shè)計任何一種培養(yǎng)基都不可能面面俱到地滿足上述各項要求,需根據(jù)具體情況,抓主要環(huán)節(jié)。使其即滿足微生物的營養(yǎng)要求,又能獲得優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)的產(chǎn)品,同時也符合增產(chǎn)節(jié)約、因地制宜的原則。發(fā)酵培養(yǎng)基的主要作用是為了獲得預(yù)期的產(chǎn)物,必須根據(jù)產(chǎn)物特點來設(shè)計培養(yǎng)基。因此要求營養(yǎng)要適當(dāng)豐富和完備,菌體迅速生長和健壯,整個代謝過程pH值適當(dāng)且穩(wěn)定;糖、氮代謝能完全符合高單位罐、批的要求,能充分發(fā)揮生產(chǎn)菌種合成代謝產(chǎn)物的能力。此外還要求成本降低。
 

  1、根據(jù)不同微生物的營養(yǎng)需要配制不同的培養(yǎng)基

  不同的微生物所需要的培養(yǎng)基成分是不同的,要確定一個合適的培養(yǎng)基,就需要了解生產(chǎn)用菌種的來源、生理生化特性和一般的營養(yǎng)要求,根據(jù)不同生產(chǎn)菌種的培養(yǎng)條件、生物合成的代謝途徑、代謝產(chǎn)物的化學(xué)性質(zhì)等確定培養(yǎng)基。

  2、營養(yǎng)成分的恰當(dāng)配比

  微生物所需的營養(yǎng)物質(zhì)之間應(yīng)有適當(dāng)?shù)谋壤?,培養(yǎng)基中的碳氮的比例(C/N)在發(fā)酵工業(yè)中尤其重要。不同的微生物菌種、不同的發(fā)酵產(chǎn)物所要求的碳氮比是不同的。菌體在不同生長階段,對其碳氮比的最適要求也不一樣。培養(yǎng)基的碳氮比不僅會影響微生物菌體的生長,同時也會影響到發(fā)酵的代謝途徑。由于碳既作碳架又作能源,所以用量要比氮多。從元素分析來看,酵母細(xì)胞中碳氮比約為100:20,霉菌約為100:10。一般發(fā)酵工業(yè)中培養(yǎng)基碳氮比約為100: (0.2~2.0),但在氨基酸發(fā)酵中,因為產(chǎn)物中含有氮,所以碳氮比就相對高一些。如谷氨酸發(fā)酵的碳氮比為100: (15~21),若碳氮比為100: (0.2~2.0),則會出現(xiàn)只長菌體,幾乎不產(chǎn)谷氨酸的現(xiàn)象。

  碳氮比隨碳水化合物及氮源的種類以及通氣攪拌等條件而異,很難確定統(tǒng)一的比值。一般情況下,碳氮比偏小,能導(dǎo)致菌體的旺盛生長,易造成菌體提前衰老自溶,影響產(chǎn)物的積累;碳氮比過大,菌體繁殖數(shù)量少,不利于產(chǎn)物的積累;碳氮比較合適,但碳源、氮源濃度高,仍能導(dǎo)致菌體的大量繁殖,增大發(fā)酵液粘度,影響溶解氧濃度,容易引起菌體的代謝異常,影響產(chǎn)物合成;碳氮比較合適,但碳源、氮源濃度過低,會影響菌體的繁殖,同樣不利于產(chǎn)物的積累。

  3、滲透壓

  配制培養(yǎng)基時,應(yīng)注意營養(yǎng)物質(zhì)要有合適的濃度。營養(yǎng)物質(zhì)的濃度太低,不僅不能滿足微生物生長對營養(yǎng)物質(zhì)的需求,而且也不利于提高發(fā)酵產(chǎn)物的產(chǎn)量和提高設(shè)備的利用率。但是,培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)的濃度過高時,由于培養(yǎng)基溶液的滲透壓太大,會抑制微生物的生長。此外培養(yǎng)基中的各種離子的濃度比例也會影響到培養(yǎng)基的滲透壓和微生物的代謝活動,因此,培養(yǎng)基中各種離子的比例需求要平衡。在發(fā)酵生產(chǎn)過程中,在不影響微生物的生理特性和代謝轉(zhuǎn)化率的情況下,通常趨向在較高濃度下進(jìn)行發(fā)酵,以提高產(chǎn)物產(chǎn)量,并盡可能選育高滲透壓的生產(chǎn)菌株。當(dāng)然,培養(yǎng)基濃度太大會使培養(yǎng)基黏度增加和溶氧量降低。

  4、pH值

  各種微生物的正常生長均需要有合適的pH值,一般霉菌和酵母菌比較適于微酸性環(huán)境,放線菌和細(xì)菌適于中性或微堿性環(huán)境。為此,當(dāng)培養(yǎng)基配制好后,若pH值不合適,必須加以調(diào)節(jié)。當(dāng)微生物在培養(yǎng)過程中改變培養(yǎng)基的pH值而不利于本身的生長時,應(yīng)以微生物菌體對各種營養(yǎng)成分的利用速度來考慮培養(yǎng)基的組成,同時加入緩沖劑,以調(diào)節(jié)培養(yǎng)液的pH值。

  5、氧化還原電位

  對大多數(shù)微生物來說,培養(yǎng)基的氧化還原電位一般對其生長的影響不大,即適合它們生長的氧化還原電位范圍較廣。但對于厭氧菌,由于氧的存在對其有毒害作用,因而往往在培養(yǎng)基中加入還原劑以降低氧化還原電位。

  在配制培養(yǎng)基時,除應(yīng)注意以上幾條原則外,還要考慮到營養(yǎng)成分的加入順序,為了避免生成沉淀而造成營養(yǎng)成分的損失,加入的順序一般為先加入緩沖化合物,溶解后加入主要物質(zhì),然后加入維生素、氨基酸等生長素類的物質(zhì)。

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