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因?yàn)橐恍┈嵤?/span>

該系列在首發(fā)文之后便停更兩周

辜負(fù)廣(zi)大(zuo)粉(duo)絲(qing)的期待

這周說什么也得接上這條腿

身為不折不扣的實(shí)驗(yàn)汪plus生信菜鳥

歷練了一身抖M的絕技

自討苦吃與銷售技術(shù)唇槍舌戰(zhàn)推杯換盞后

綜合質(zhì)量與銅板的考量

總結(jié)了一套diao絲玩得起的辟邪劍譜

今日寡人風(fēng)雨兼程地推出

轉(zhuǎn)錄組RNA-seq的建庫詳解

依舊向諸位力薦天朝某贊的kit

還是先看過原理圖咯

是否有點(diǎn)似曾相識？

不記得上一講的同學(xué)點(diǎn)這里

轉(zhuǎn)錄組建庫就是比基因組多個(gè)反轉(zhuǎn)錄

但由于起始Input是總RNA

mRNA捕獲片段化等過程中一定注意

RNase FREE?。?！

RNase FREE?。?！

RNase FREE?。?！

然后 流程快照

二鏈合成一步純化后

就和基因組建庫么區(qū)別啦！

那么。。。

涉及各組分的細(xì)節(jié)呢？

除了前面原理圖以外

這里可以再多補(bǔ)充一點(diǎn)

與dsDNA不同

RNA的片段化不靠超聲或酶解

而是利用二價(jià)金屬離子和高溫

也就是說那個(gè)frag/prime

含有Mg2+、Zn2+等

通過溫度和時(shí)間調(diào)節(jié)片段大小

其他的細(xì)節(jié)作為商機(jī)

喜歡打破砂鍋問到底的童鞋

比起DNA建庫

轉(zhuǎn)錄組還是麻煩了許多

步驟多、還易錯(cuò)

安利補(bǔ)救小貼士

還有幾點(diǎn)提示

LncRNA要用連特異性建庫

常規(guī)片段化后再反轉(zhuǎn)錄(單細(xì)胞相反)

其他品牌有細(xì)微差異，譬如

反轉(zhuǎn)錄加接頭、環(huán)化文庫、特異ID去dup等

以上內(nèi)容

未來會加以介紹

敬請期待 ; )