九色国产,午夜在线视频,新黄色网址,九九色综合,天天做夜夜做久久做狠狠,天天躁夜夜躁狠狠躁2021a,久久不卡一区二区三区

逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，作為分子生物學(xué)研究的基本技術(shù)之一，已經(jīng)廣泛應(yīng)用到多個研究領(lǐng)域，可以說是科研人員進行RNA功能研究的看家本事。

眾所周知，逆轉(zhuǎn)錄的應(yīng)用領(lǐng)域有以下6種：

• 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)（RT-PCR）

• 定量RT-PCR（RT-qPCR）

• cDNA克隆和文庫構(gòu)建

• cDNA末端快速擴增（RACE）

• 基因表達芯片

• RNA測序（RNA-Seq）

今天，小編就整理了一些貼士，幫助大家在面對6種不同的應(yīng)用時，如何正確選擇逆轉(zhuǎn)錄酶。

在RT-PCR中，逆轉(zhuǎn)錄酶將RNA轉(zhuǎn)化為cDNA，然后通過PCR反應(yīng)擴增cDNA,為下游實驗提供研究模板，因而逆轉(zhuǎn)錄酶是實驗成功的關(guān)鍵步驟之一（如下圖）。選定的逆轉(zhuǎn)錄酶應(yīng)對所有樣本均具有最高效率，即便是難轉(zhuǎn)錄RNA樣本，如降解、抑制劑殘留或具有高度二級結(jié)構(gòu)的RNA樣本。

圖. 逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)（RT-PCR）。RT =逆轉(zhuǎn)錄，RTase =逆轉(zhuǎn)錄酶

常用的RT-PCR方法分為一步法和兩步法，每種方法都各有優(yōu)缺點，簡要概述如下：

表. 對比一步法和兩步法RT-PCR 

想要直觀、生動的了解這兩種方法的不同，可以點擊“閱讀原文”觀看如下視頻

定量RT-PCR（RT-qPCR）的最常見應(yīng)用之一是通過對細胞和組織一段時間或事件后（如，藥物治療）實時mRNA水平的定量分析。RT-qPCR比RT-PCR的靈敏度更高， RT-qPCR基因表達定量的準確性在很大程度上取決于cDNA模板的質(zhì)量和數(shù)量。因此，逆轉(zhuǎn)錄對于RT-qPCR的成功至關(guān)重要。所選擇的逆轉(zhuǎn)錄酶應(yīng)該具有以下特點：

• 高效合成cDNA的能力，即使是對低豐度基因以及次優(yōu)質(zhì)和/或難轉(zhuǎn)錄RNA樣本。

• 在寬的RNA起始量范圍內(nèi)，cDNA的動態(tài)范圍或線性度最佳，可確?；虮磉_定量的準確性。

• 所選試劑在擴增過程中應(yīng)產(chǎn)生較高且一致的cDNA得率，以獲得具有高靈敏度和低變異性的基因表達結(jié)果?？煽紤]預(yù)混液形式的逆轉(zhuǎn)錄酶用以可以減少實驗誤差。

RT-qPCR的一個特殊程序是從未經(jīng)RNA分離的粗細胞裂解物直接進行逆轉(zhuǎn)錄。在使用稀缺樣本或選用群體內(nèi)特定細胞的實驗，可考慮使用直接RT-qPCR法來防止可能的樣本損失和低RNA回收。