Melatonin prevents obesity through 

modulation of gut microbiota in mice 

褪黑素通過調(diào)節(jié)小鼠腸道菌群預防肥胖

IF：9.314 期刊：Journal of Pineal Research

時間：2017.03  單位：北京師范大學 、百邁客生物科技

研究背景

肥胖是一個非常嚴重的健康威脅因素，在2014年全球體重超標的成年人達到20億，其中至少有6億是肥胖癥。有大量研究表明肥胖是癌癥和一些慢性疾病，如糖尿病、脂肪肝、心血管疾病等的風險因素?，F(xiàn)如今肥胖已經(jīng)超越吸煙，成為世界范圍內(nèi)最嚴重的健康威脅。目前研究表明腸道菌群失調(diào)會導致肥胖及其并發(fā)癥的發(fā)生。已有研究揭示褪黑素可以促進體重的下降以及自身能量的平衡，但是褪黑素的益生作用是否與腸道微生態(tài)有關(guān)，目前尚未報導。而本研究發(fā)現(xiàn)，褪黑素是通過改變腸道微生物結(jié)構(gòu)來預防肥胖及其并發(fā)疾病。

研究方法

小鼠隨機分為3組，NCD（正常膳食）、HFD（高脂肪膳食）、HFD+M（高脂肪膳食+褪黑素）

Illumina MiSeq；16S rRNA V3+V4;

組織學分析，生化分析，葡萄糖和胰島素耐受分析，蛋白質(zhì)印記分析。

研究成果

1， 褪黑素能顯著地控制體重增加

1） HFD組小鼠體重顯著增加，而HFD+褪黑素組小鼠體重得到有效控制，如下圖A。

2）分離小鼠四類主要的脂肪組織（Epi-WAT、Mes-WAT、Per-WAT、Ing-SAT），發(fā)現(xiàn)HFD顯著促進這四類脂肪組織重量的增加，而褪黑素能有效抑制這四類脂肪組織重量的增加，如下圖B-E。

2， 褪黑素能控制白色脂肪組織，脂肪肝，系統(tǒng)性炎癥

1） 通過比較Epi-WAT脂肪細胞的大小，發(fā)現(xiàn)HFD組脂肪細胞顯著增大；而褪黑素通過減少>12000μm2的細胞數(shù)目，增加2000–8000μm2的細胞數(shù)目，使HFD+褪黑素組脂肪細胞大小維持在正常范圍內(nèi)，如下圖A-C。

2） 通過比較Epi-WAT脂肪生成基因（FAS和ACC-1）的表達量，發(fā)現(xiàn)HFD顯著促進FAS和ACC-1的表達，而褪黑素顯著抑制FAS基因的表達，如下圖D和E。

3） 通過觀察油紅O染色及比較肝臟TC含量，發(fā)現(xiàn)褪黑素能顯著抑制肝臟內(nèi)脂質(zhì)積累，如下圖F和G。

4） 通過比較血液內(nèi)毒素（LPS）和炎癥性細胞因子（TNFα和IL-6）的水平，發(fā)現(xiàn)褪黑素能顯著抑制內(nèi)毒素血癥和系統(tǒng)性炎癥的發(fā)生，如下圖H-K。

3， 褪黑素能改善葡萄糖耐受性及胰島素抗性

1） 通過比較血脂含量，發(fā)現(xiàn)HFD顯著提高TG和TC含量，而褪黑素能顯著降低TG和TC的含量，如下圖A和B。

2） 通過比較血糖和胰島素含量，并推導HOMA-IR和QUICKI指數(shù)，發(fā)現(xiàn)褪黑素能有效保護胰島素敏感性，并且使血糖和胰島素的含量發(fā)生顛倒，從而使HOMA-IR和QUICKI指數(shù)趨于正常水平，如下圖C-F。

3） 通過葡萄糖耐受試驗（IPGTT）和胰島素耐受試驗（ITT）分析，發(fā)現(xiàn)褪黑素能顯著改善葡萄糖耐受性及胰島素抗性，如下圖G和H。

4， 褪黑素能促進棕色脂肪組織褐變及產(chǎn)熱

1） 通過棕色脂肪組織（BAT）石蠟切片分析，發(fā)現(xiàn)HFD促進脂質(zhì)積累（切片白化），而褪黑素表現(xiàn)出相反的作用，并且褪黑素促進BAT中UCP1蛋白的表達，如下圖A。

在BAT中，褪黑素顯著增強產(chǎn)熱基因UCP1和UCP3的表達，如下圖B和C；線粒體生物合成基因PGC1α，脂肪酸分解代謝基因CPT1β，脂質(zhì)轉(zhuǎn)運基因CD36 和FABP的表達量也有提高，盡管未達到統(tǒng)計學的顯著性，如下圖D-G。

5， 褪黑激素改變腸道微生物結(jié)構(gòu)

1） 通過對小鼠腸道菌群結(jié)構(gòu)分析，發(fā)現(xiàn)褪黑素能顯著降低OTU的數(shù)目以及微生物的豐富度和多樣性，如下圖A-H。

2） 門水平菌落結(jié)構(gòu)分析，發(fā)現(xiàn)HFD顯著降低擬桿菌門（Bacteroidetes）的相對豐度，而顯著提高厚壁菌門（Firmicutes）的相對豐度。而褪黑素的加入會降低厚壁菌門/擬桿菌門的比例，并且會顯著提高疣微菌門（verrucomicrobia）的相對豐度，如下圖I。

3） 屬水平菌落結(jié)構(gòu)分析，發(fā)現(xiàn)褪黑素顯著提高Akkermansia的相對豐度，Akkermansia屬于疣微菌門（verrucomicrobia），如下圖J。

4） UPGMA、NMDS、PCA、PCoA分析，發(fā)現(xiàn)褪黑素顯著改變了腸道菌群的結(jié)構(gòu)，如下圖K-N。

6，褪黑素能調(diào)節(jié)腸道菌群中的標志微生物

1)  如下圖顯示，在三個分組中一共找到85個相對豐度有顯著差異的OUT。與NCD組相比，HFD組有27個相對豐度顯著增高的OTU，42個顯著降低的OTU。與HFD組相比，添加了褪黑素的組有10個相對豐度顯著增高的OTU，20個顯著降低的OTU；而在這30個差異性的OTU中，有14個OTU的變化方向與和NCD組比較的結(jié)果完全相反。這14個OTU屬于Ruminococcaceae、Desulfovibrionaceae、Bacteroides、Porphyromonadaceae、Helicobacteraceae、Christensenellaceae，有研究表明這些微生物與肥胖相關(guān)。

2) LEfSe分析，發(fā)現(xiàn)褪黑素顯著提高Akkermansia的相對豐度，Akkermansia即是降低高脂肪膳食小鼠體重的有益菌。而褪黑素顯著降低Alistipes、Anaerotruncus、Helicobacter marmotae的相對豐度，則這三種細菌預防肥胖的有害菌?？傊?，褪黑素能夠使高脂肪膳食小鼠的腸道菌群由失調(diào)狀態(tài)轉(zhuǎn)為正常狀態(tài)，從而抑制體重的增加。

參考文獻：

Xu P, Wang J, Hong F, et al. Melatonin prevents obesity through modulation of gut microbiota in mice[J]. Journal of Pineal Research, 2017.