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Roche LightCycler^?480 II

非凡體驗謀求突破，專業(yè)設(shè)計詮釋經(jīng)典

前幾篇文章，我們分別介紹了Roche LightCycler^?480 II的卓越特點：

溫控系統(tǒng)--獨具匠心的PCR熱循環(huán)模塊設(shè)計

優(yōu)秀的光學(xué)及軟件系統(tǒng)--適用于高通量應(yīng)用中追求靈活的數(shù)據(jù)處理及分析

性能優(yōu)異--寬泛的動力學(xué)范圍

這篇文章主要為大家講述，Roche LightCycler^?480 II實時熒光定量PCR儀高分辨率熔解曲線分析，尤其在基因分型方面的應(yīng)用！

Roche LC 480 II 的誕生歷史

LightCycler^?480 II高分辨率熔解曲線分析

基因分型

可靠的熔解曲線法，還是方便的終點法，一直是基因分型方法選擇的難題，如今LightCycler^?480 II讓取舍不再是問題！

LightCycler^?480 II作為新一代實時定量PCR系統(tǒng)的代表，通過硬件、軟件和相關(guān)試劑的整合優(yōu)化，可實現(xiàn)所有利用實時定量PCR進(jìn)行遺傳變異檢測的的方法。其中最典型的可分為兩類， 1、對已知變異進(jìn)行檢測的特異性探針法； 2、對未知變異進(jìn)行檢測的高分辨率熔解曲線法。

單核苷酸多態(tài)現(xiàn)象(SNP)是自然界最多的一種遺傳變異現(xiàn)象，超過90%的生物個體差異是由SNP造成的。近年來SNP的檢測和鑒定(SNP分型)已經(jīng)成為遺傳學(xué)研究的一項關(guān)鍵技術(shù)。對于已知SNP位點的識別，LightCycler^?480 II提供了利用TaqMan探針(水解探針)通過終點法進(jìn)行SNP分型，和利用雜交探針通過熔解曲線法進(jìn)行SNP分型兩種選擇。

LightCycler^?480 II高分辨率熔解曲線分析

高分辨率熔解曲線分析

HRM方法可大幅降低基因分型難度和成本，使LightCycler^?480 II 完全成為了一臺全功能的遺傳分析系統(tǒng)，不僅僅是定量PCR！

高分辨率熔解曲線(High-Resolution Melt, HRM)是一種用于突變掃描和基因分型的遺傳學(xué)分析方法。 HRM能夠直接用染料而非標(biāo)記探針準(zhǔn)確地區(qū)分單堿基突變所帶來的溫度差異，這對實時定量PCR系統(tǒng)提出了前所未有的要求。 LightCycler^?480 II在加熱模塊和冷卻元件之間引入的高效熱平衡技術(shù)(Therma-BaseTM)使溫控系統(tǒng)的熱均一性獲得了技術(shù)性的進(jìn)步。同時其精巧的光學(xué)系統(tǒng)設(shè)計通過光學(xué)元件及焦距的巧妙組合確保了整板信號激發(fā)的特異性與數(shù)據(jù)收集的一致性，從而消除了邊緣效應(yīng)。為開展高分辨率熔解曲線分析的研究者提供了一個理想的硬件平臺。

同時，其優(yōu)勢的軟件算法通過對熔解曲線歸一化處理及平移，能夠在不改變曲線相對位置的前提下，凸顯差異，以相當(dāng)高的分辨率區(qū)分不同堿基變異的差別。

再結(jié)合羅氏應(yīng)用科學(xué)部開發(fā)的DNA雙鏈飽和結(jié)合染料：ResoLight?，借助其高強度、高信噪比、耐淬滅、在飽和結(jié)合濃度下對PCR無抑制效應(yīng)等出色性能，完全可以保障您在這一高端應(yīng)用領(lǐng)域獲得滿意的成果！

LightCycler^?480 II高分辨率熔解曲線分析

高分辨率熔解曲線分析

出色的定量PCR硬件、分析軟件和試劑，方能成就高準(zhǔn)確度的高分辨率熔解曲線分析

高分辨率熔解曲線分析應(yīng)用：

? 發(fā)現(xiàn)新的SNP位點

? 已知SNP的檢測分析

? 單倍型分析

? 雜合性喪失的篩查

? 種群中的等位優(yōu)勢分析

? 分類學(xué)物種鑒定

? DNA遺傳作圖 (發(fā)現(xiàn)攜帶高度可變座位的個體)

? 潛在易感基因的鑒別

? DNA甲基化分析

? RNA編輯

? 個性化診療

? 腫瘤突變篩查

未知突變位點篩查——由于其對DNA Tm值變化的高度敏感性， HRM可以直接通過染料檢測擴增子上的未知單堿基突變，無需借助熒光基團(tuán)標(biāo)記的探針（圖14a），如發(fā)現(xiàn)靶基因擴增產(chǎn)物中是否存在SNP或其它突變。

已知單堿基突變——可以通過非標(biāo)記的探針進(jìn)行相比篩查未知突變位點的HRM法，同樣不需要標(biāo)記探針，極大地降低了實驗設(shè)計、探針合成及操作的成本和復(fù)雜度（圖14b）。同時還可在同一次試驗中結(jié)合以上兩種方法（圖14c），獲得更多的序列信息。該方法簡單、準(zhǔn)確度高，可通過初篩迅速從大量樣品中獲得突變個體，從而將測序成本降低至原有的數(shù)百分之一。

LightCycler^?480 II高分辨率熔解曲線分析

高分辨率熔解曲線分析

為DNA甲基化現(xiàn)象和疾病研究提供可靠平臺

甲基化研究對于了解基因的調(diào)控模式以及疾病的分子生物學(xué)機制具有重要意義：發(fā)育、癌腫瘤發(fā)生、基因印跡、 X染色體失活及相關(guān)遺傳性疾病等。結(jié)合甲基化比例已知的標(biāo)準(zhǔn)樣本， HRM方法可用于定量檢測未知樣品中該基因的甲基化程度(圖15)。此外還可通過類似的方法對未知樣品中特定基因型的豐度和表達(dá)水平進(jìn)行準(zhǔn)確度高的測定(圖16)。

腫瘤中某些基因的DNA甲基化狀態(tài)的變化通過其生物學(xué)特征反映出來。因此，評估DNA甲基化的快速高通量方法對研究者和臨床醫(yī)生都非常有價值?？赏ㄟ^甲基化敏感性高分辨熔解分析(MS-HRM)測定法對兩種已知的經(jīng)過啟動子(FANCE和MGMT)甲基化的DNA修復(fù)基因的檢測性能。如圖顯示MS-HRM測定法是快速高通量研究DNA甲基化的可靠檢測平臺。