三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)(TLSs)是在非淋巴組織中發(fā)現(xiàn)的淋巴結(jié)構(gòu)（有組織的免疫細(xì)胞聚集物）。TLSs不存在于生理?xiàng)l件下，但出現(xiàn)在慢性炎癥的背景下，如自身免疫性疾病、慢性炎癥疾病和腫瘤。TLSs促進(jìn)免疫細(xì)胞流入腫瘤部位，除了少數(shù)例外，腫瘤中TLSs的存在與免疫治療后的更好的預(yù)后和臨床結(jié)果相關(guān)，因此作為一種提高患者抗癌免疫和良好治療反應(yīng)的手段引起了人們的興趣。
既然三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)是如此attractive，今天我們一起來(lái)讀這篇NC新鮮出爐的基于單細(xì)胞測(cè)序探究子宮內(nèi)膜癌中的三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)的研究吧~
目前對(duì)于三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)(TLSs)的識(shí)別主要有兩種方式，一種是基于12個(gè)細(xì)胞因子的signature，一種是基于HE染色的結(jié)果，這兩種方式均存在一定弊端，前者：臨床上較難獲取，后者：病理學(xué)家之間的重復(fù)性較差。所以需要開發(fā)簡(jiǎn)單的生物標(biāo)志物。
來(lái)自6個(gè)子宮內(nèi)膜癌患者的1501個(gè) B 細(xì)胞的自測(cè)單細(xì)胞轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)。
TCGA中子宮內(nèi)膜癌患者的RNAseq數(shù)據(jù)及HE染色。
TransPORTEC biobank中子宮內(nèi)膜癌患者的HE染色及L1CAM染色。
PORTEC-3 biobank 中子宮內(nèi)膜癌患者的疾病亞型信息, 三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)信息, CD8 及CD20 細(xì)胞密度信息，生存信息。
（1）腫瘤浸潤(rùn)B細(xì)胞的單細(xì)胞測(cè)序圖譜
通過(guò)對(duì)腫瘤浸潤(rùn)B細(xì)胞的單細(xì)胞測(cè)序數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類及細(xì)胞群鑒定，作者將所測(cè)到的B細(xì)胞細(xì)分為3種類型：na?ve B cells，Germinal Centre B cells，plasma cells。為了確認(rèn)每個(gè)cluster的細(xì)胞身份，作者還將其測(cè)序的細(xì)胞數(shù)據(jù)集映射到扁桃體B細(xì)胞的參考數(shù)據(jù)集上，鑒定結(jié)果基本一致。
（2）L1CAM基因在成熟的三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)中表達(dá)
Memory B cells（MBC）和Germinal Centre B cells的存在，說(shuō)明可能是正在進(jìn)行三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)(TLSs)的形成。為了驗(yàn)證上述推測(cè)，作者對(duì)TCGA中的HE染色切片進(jìn)行觀察，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)(TLSs)在MMRd和POLEmut疾病亞型中較為常見。作者基于三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)(TLSs)有無(wú)，對(duì)TCGA樣本進(jìn)行分組，并進(jìn)行組間差異分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)有三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)(TLSs)的樣本組中與CD8 T細(xì)胞及效應(yīng)細(xì)胞相關(guān)的基因高表達(dá)。從上述差異基因列表中，作者還發(fā)現(xiàn)了一個(gè)在三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)(TLSs)的樣本組中高表達(dá)的基因L1CAM，該基因的組織染色位于成熟的三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)的發(fā)生中心，且與follicular dendritic cell (FDC) 的marker基因CD21共定位。為了進(jìn)一步探究L1CAM是否可以作為成熟三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)(TLSs)的標(biāo)記物，作者對(duì)TransPORTEC biobank中子宮內(nèi)膜癌患者的HE染色及L1CAM染色結(jié)果中L1CAM和三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)(TLSs)出現(xiàn)的一致性進(jìn)行了分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者之間存在較好的一致性。
編者按：MMRd這種疾病亞型屬于子宮內(nèi)膜癌各種亞型中預(yù)后情況居中的，不算最好，但是也不差，而POLEmut亞型屬于預(yù)后較好的。有文章報(bào)道L1CAM基因可以作為follicular dendritic cell (FDC) 的marker基因，所以可以和該細(xì)胞類型的marker基因共定位。
（3）與成熟的三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)相關(guān)的臨床信息
為了評(píng)估成熟的三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)的臨床病理相關(guān)性，作者對(duì)PORTEC-3 biobank中的組織切片進(jìn)行了分析。最終在378個(gè)子宮內(nèi)膜癌組織中的71個(gè)切片中觀察到三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)（主要存在于腫瘤浸潤(rùn)邊界和子宮肌層），與TCGA中的觀察結(jié)果類似，MMRd疾病亞型和POLEmut疾病亞型樣本中三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)較為常見，且CD8 及 CD20 細(xì)胞密度在MMRd疾病亞型和POLEmut疾病亞型樣本中也較高，其中CD8 細(xì)胞密度與三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)存在之間的相關(guān)性較高。
編者按：MMRd疾病亞型和POLEmut疾病亞型樣本中三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)較為常見，這支持了三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)可能參與免疫原性腫瘤新抗原反應(yīng)形成的假設(shè)，因?yàn)橛醒芯勘砻餍驴乖赡艹霈F(xiàn)在高突變負(fù)荷的腫瘤中。
接下來(lái)作者進(jìn)一步評(píng)估了三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)與疾病預(yù)后的關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)的存在是子宮內(nèi)膜癌復(fù)發(fā)時(shí)間和腫瘤相關(guān)死亡時(shí)間的顯著有利預(yù)后因素。多變量回歸分析進(jìn)一步證明三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)是一個(gè)顯著的、獨(dú)立的有利的復(fù)發(fā)預(yù)測(cè)因子。
編者按：成熟三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)的存在是決定POLEmut和部分MMRd 疾病亞型患者預(yù)后良好的重要因素。
作者在高危子宮內(nèi)膜癌患者中，使用L1CAM免疫組化評(píng)估了成熟三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)的存在，提高了在臨床病理危險(xiǎn)因素和分子分類之外的復(fù)發(fā)和死亡預(yù)測(cè)的準(zhǔn)確性。這里需要回顧本研究的研究背景，即目前常用的三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)檢測(cè)方法均存在弊端，而本研究提出的，對(duì)于三級(jí)淋巴結(jié)構(gòu)檢測(cè)采用單一免疫組化染色（L1CAM）具有較高的觀察者間一致性，在臨床試驗(yàn)和常規(guī)診斷中易于實(shí)現(xiàn)。
參考文獻(xiàn)：
Schumacher TN, Thommen DS. Tertiary lymphoid structures in cancer. Science. 2022 Jan 7;375(6576):eabf9419. doi: 10.1126/science.abf9419. Epub 2022 Jan 7. PMID: 34990248.
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