蛋白酶抑制劑
破碎細(xì)胞提取蛋白質(zhì)的同時可釋放出蛋白酶，這些蛋白酶需要迅速的被抑制以保持蛋白質(zhì)不被降解。在蛋白質(zhì)提取過程中，需要加入蛋白酶抑制劑以防止蛋白水解。以下列舉了5種常用的蛋白酶抑制劑和他們各自的作用特點，因為各種蛋白酶對不同蛋白質(zhì)的敏感性各不相同，因此需要調(diào)整各種蛋白酶的濃度。由于蛋白酶抑制劑在液體中的溶解度極低，尤其應(yīng)注意在緩沖液中加人蛋白酶抑制劑時應(yīng)充分混勻以減少蛋白酶抑制劑的沉淀。在寶靈曼公司的目錄上可查到更完整的蛋白酶和蛋白酶抑制劑表。
常用抑制劑
PMSF
1)抑制絲氨酸蛋白酶(如胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶)和巰基蛋白酶(如木瓜蛋白酶);
2)10mg/ml溶于異丙醇中;
3)在室溫下可保存一年;
4)工作濃度:17~174ug/ml(0.1~1.0mmol/L);
5)在水液體溶液中不穩(wěn)定，必須在每一分離和純化步驟中加入新鮮的PMSF。
EDTA
1)抑制金屬蛋白水解酶;
2)0.5mol/L水溶液，pH8~9;
3)溶液在4℃穩(wěn)定六個月以上;
4)工作濃度:0.5~1.5mmol/L. (0.2~0.5mg/ml);
5)加入NaOH調(diào)節(jié)溶液的pH值，否則EDTA不溶解。
胃蛋白酶抑制劑(pepstantin)
l)抑制酸性蛋白酶如胃蛋白酶，血管緊張肽原酶，組織蛋白酶D和凝乳酶;
2)1mg/ml溶于甲醇中;
3}儲存液在4℃一周內(nèi)穩(wěn)定，-20℃穩(wěn)定6個月;
4)1作濃度:0.7ug/ml(1umol/L)
5)在水中不溶解。
亮抑蛋白酶肽(leupeptin)
1)抑制絲氨酸和巰基蛋白酶，如木瓜蛋白酶，血漿酶和組織蛋白酶B;
2)lOmg/ml溶于水;
3)儲存液4℃穩(wěn)定一周，-20℃穩(wěn)定6個月;
4)工作濃度0.5mg/ml。
胰蛋白酶抑制劑(aprotinin)
1)抑制絲氨酸蛋白酶，如血漿酶，血管舒緩素，胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶;
2)lOmg/ml溶于水，pH7~8
3}儲存液4℃穩(wěn)定一周，-20℃穩(wěn)定6個月;
4)工作濃度:0.06~2.0ug/ml(0.01~0.3umol/L);
5)避免反復(fù)凍融:
6)在pH>12.8時失活。
蛋白酶抑制劑混合使用
35ug/ml PMSF…………………………………絲氨酸蛋白酶抑制劑
0.3mg/ml EDTA…………………………………金屬蛋白酶抑制劑
0.7ug/ml胃蛋白酶抑制劑(Pepstatin)…………酸性蛋白酶抑制劑
0.5ug/ml亮抑蛋白肽酶(Leupeptin)……………廣譜蛋白酶抑制劑
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