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胰腺酶學(xué)檢查

胰腺酶學(xué)檢查

胰腺是人體第二大腺體,也是消化過程中起主要作用的消化腺,它由兩種不同功能的腺體所組成,即胰的外分泌腺和胰的內(nèi)分泌腺。胰的外分泌腺分泌胰液,每日分泌的胰液約1~2L,為無色、透明、略帶粘性,pH7.0~8.3,比重1.007~1.042,內(nèi)含有無機(jī)物和有機(jī)物。有機(jī)物主要是蛋白酶類,如胰淀粉酶、胰脂肪酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶等。正常胰腺分泌的酶幾乎全部進(jìn)入十二指腸,只有很少一部分進(jìn)入血液。胰腺功能檢測,雖然有多種方法,但是仍然是以血、尿淀粉酶的測定為多。對于急性胰腺炎的早期診斷、療效監(jiān)測有重要意義。近年來對胰脂肪酶的測定也有所重視。

目錄
  • 淀粉酶測定
  • 脂肪酶測定

淀粉酶測定

淀粉酶(amylase,AMY)屬于水解酶類,催化淀粉及糖原水解。AMY分α、β兩類。人體中淀粉酶屬于α淀粉酶,又稱淀粉內(nèi)切酶,不僅作用于淀粉的末端,還可隨機(jī)地作用于淀粉分子內(nèi)部的α-1,4糖苷鍵,降解產(chǎn)物為葡萄糖、麥芽糖及含有α-1,6糖苷鍵支鏈的糊精。人體除胰腺(pancreas)、唾液腺(salivary gland)外,其他一些組織(如肺、卵巢、睪丸等)的提取物也發(fā)現(xiàn)有AMY活性。血液中AMY主要來自胰腺和唾液腺,由于淀粉酶的分子量(5.5~6.0KD)較小,可以通過腎小球?yàn)V過膜出現(xiàn)在尿中。
血清中AMY主要有兩種同工酶,即同工酶P(來源于胰腺)及同工酶S(來源于唾液腺或其他組織)。同工酶P又可分為P1~P4等亞型,同工酶S也可分為S1~S4等亞型。測定血清AMY同工酶,可以鑒別其來源,從而提高AMY診斷的特異性。
 ㈠ 適應(yīng)癥:①原因不明的急性上腹部疼痛,急腹癥的鑒別。②急慢性胰腺炎的診斷與療效監(jiān)測。③胰腺癌、胰腺外分泌功能障礙的輔助診斷。④膽道系統(tǒng)疾病。⑤各種大手術(shù)后、休克、外傷等。⑥逆行胰膽管造影術(shù)后。⑦懷疑流行性腮腺炎。
 ㈡ 標(biāo)本采集:①血清或肝素抗凝血漿。絡(luò)合鈣離子的抗凝劑,如枸櫞酸鈉、EDTA抗凝血漿不宜用于測定。②隨機(jī)尿或24h尿。
 ㈢ 檢測方法
 1、淀粉酶活性測定
 ⑴碘-淀粉比色法:以100ml血清中淀粉酶在37℃、15min水解5mg淀粉為1單位(U)。本法簡單、實(shí)用,但方法難于標(biāo)準(zhǔn)化,現(xiàn)已少用。
 ⑵酶偶聯(lián)法:淀粉酶水解底物—對硝基苯麥芽庚糖苷(4NP-G7),生成寡糖及葡萄糖單位減少的對硝基苯麥芽庚糖苷(4NP-G2、4NP-G3、4NP-G4),后者經(jīng)預(yù)先加入的α葡萄糖苷酶水解生成黃色的對硝基苯酚和葡萄糖,連續(xù)監(jiān)測405nm處對硝基苯酚吸光度的變化率,可以測出淀粉酶的活性。本法易于標(biāo)準(zhǔn)化,為國際臨床化學(xué)學(xué)會的推薦方法,可用于自動分析儀。
2、尿淀粉酶清除率(Cam)和肌酐清除率(Ccr)的比值(Cam /Ccr):急性胰腺炎患者淀粉酶的腎臟清除率明顯增高,而肌酐清除率不受影響,測定Cam /Ccr比值可大大提高對急性胰腺炎診斷的敏感度與特異性,有助于鑒別急性胰腺炎和其它原因的高AMY血癥。Cam /Ccr比值按下面公式計算,血液和尿液AMY和肌苷(Cr)同時取標(biāo)本測定,尿液可為隨機(jī)尿或2~4h定時尿。此外,隨機(jī)尿液標(biāo)本的淀粉酶活性,也可以每克肌苷(gCr)報告,可避免尿量的影響。   
             尿AMY(U/L)×血清Cr(μmol/L)
 Cam /Ccr=―――――――――――――――――― ×100%
                     血清AMY(U/L)×尿Cr(μmol/L)

 3、淀粉酶同工酶測定
 ⑴免疫抑制法:用抗體封閉同工酶S后測定同工酶P活性。
 ⑵電泳法:醋酸纖維膜電泳、聚丙稀酰胺凝膠電泳、等電聚焦電泳等方法。
 ㈣參考范圍
 1、血清(漿)AMY:<220U/L(酶偶聯(lián)法)或800~1800U/L(碘—淀粉比色法)。
 2、尿液AMY:①隨機(jī)尿:<1000U/L(酶偶聯(lián)法)或<680U/gCr(酶偶聯(lián)法);840~6240U/L(碘—淀粉比色法)。②24h尿:<900U/L(酶偶聯(lián)法)。
 3、Cam /Ccr:2%~5%。
 4、AMY同工酶P(免疫抑制+酶偶聯(lián)法):血清<115U/L,尿液<800U/L或<470U/gCr。
 ㈤臨床意義
 血清或尿液淀粉酶水平作為一種胰腺外分泌功能試驗(yàn)具有重要的意義。當(dāng)胰腺或腮腺組織受損時,血清和尿液中的總AMY活性增高,但其他含AMY的組織,如肺、骨骼肌、子宮、睪丸、膽囊、胃等受損時也可使AMY活性增高,但不如胰腺或腮腺病變增高的幅度大。腎的排泄功能也可影響血清或尿液中AMY水平。血清中AMY半衰期很短,約2h,所以病變時血清淀粉酶增高早、但持續(xù)時間很短;尿液中AMY水平增加晚、但持續(xù)時間長。
 1、淀粉酶活性增高:①急性胰腺炎:急性胰腺炎發(fā)病后2~12h,血液中AMY開始升高,12~72h達(dá)高峰,可達(dá)參考范圍上限的4~6倍或更高,一般2~5d可下降至參考范圍;若持續(xù)升高,則提示病變有反復(fù)或出現(xiàn)并發(fā)癥。尿液AMY在發(fā)病后12~72h開始升高,下降比血清緩慢。因此急性胰腺炎的后期或恢復(fù)期測定尿液AMY更有價值。AMY升高的幅度與胰腺損傷程度不一定成比例,但升高越是顯著,患急性胰腺炎的可能性越大。壞死性胰腺炎時,原來升高的AMY可出現(xiàn)降低。②慢性胰腺炎:血液AMY中度或輕度升高,尿液AMY可增高或變化不大。③ 胰腺癌:癌早期即可增高,尤其是胰頭癌。④ 腮腺炎:血清AMY升高,同工酶S升高,說明AMS來源于腮腺,同時血脂肪酶不高,可與胰腺炎鑒別。⑤ 急腹癥:消化道潰瘍穿孔、腸梗阻、膽石癥、急性膽囊炎等。⑥ 服用鎮(zhèn)靜劑:如注射嗎啡、海洛因中毒等。⑦ 酒精中毒。⑧ 腎功能不全。⑨ 巨淀粉酶血癥:AMY可與免疫球蛋白等形成復(fù)合物,或酶分子本身聚合成為巨淀粉酶分子,這種分子不能通過腎小球,血清中AMY升高,尿AMY不增高,可見于少數(shù)健康人及乙醇中毒、糖尿病、肝病、惡性腫瘤和自身免疫疾病、艾滋病等。
 2、淀粉酶活性降低:①慢性胰腺炎:血液AMY亦可降低,顯著減低表示胰組織受到嚴(yán)重破壞。②胰腺癌:若癌組織引起梗阻時間過長,可導(dǎo)致腺體組織纖維化而引起AMY分泌減少。③嚴(yán)重腎功能不全,排瀉淀粉酶障礙,尿液AMY可降低。④巨淀粉酶血癥時,尿液AMY降低。
3、尿淀粉酶清除率(Cam)和肌酐清除率(Ccr)的比值(Cam /Ccr)
⑴ 約85%的急性胰腺炎Cam/Ccr比值增高,可達(dá)7%~15%;約90%的慢性復(fù)發(fā)性胰腺炎患者升高。
⑵ 膽結(jié)石患者如血清AMY活性升高的同時伴有Cam /Ccr比值增高,則常提示并發(fā)急性胰腺炎。
⑶ 血淀粉酶不增高的急性胰腺炎患者,Cam /Ccr比值可增高,因此,對血淀粉酶正常的急性胰腺炎患者測定Cam /Ccr比值將更有意義。
⑷ 慢性胰腺炎、胰腺癌患者Cam /Ccr均在4%以下,巨淀粉酶血癥的Cam /Ccr減低,可低于1%以下。
⑸ Cam /Ccr比值增高還可見于糖尿病酸中毒、燒傷、腎功能衰竭、腹部手術(shù)等。
⑹如標(biāo)本采集時間不合適,患者病情較輕,或有淀粉酶活性抑制劑存在時,急性胰腺炎患者Cam /Ccr亦可正常。
⑺ Cam /Ccr比值與年齡有關(guān),20歲以下年齡組低于30~50歲年齡組。
4、淀粉酶同工酶:由于急性胰腺炎、急性腮腺炎等的血清淀粉酶同工酶成分不同,電泳分析血清同工酶有鑒別診斷意義,見圖5-2-1?,F(xiàn)在有測定P-AMY的試劑盒,便于臨床應(yīng)用,除非必須,不一定都做電泳分析。
㈥評價與問題
1、AMY測定方法的影響:淀粉酶測定方法較多,不同方法所得參考范圍有所不同,在使用前必須了解所用方法及其本實(shí)驗(yàn)室制定的參考范圍。
2、年齡的影響:新生兒血清中AMY約為成年人的18%,主要為同功酶S, 5歲時達(dá)成人水平。1歲以內(nèi)幾乎無同工酶P,1歲以后隨年齡增大逐漸升高,10~15歲達(dá)到成年人水平。
3、診斷胰腺炎的敏感度和特異性:目前國內(nèi)對急性胰腺炎的實(shí)驗(yàn)診斷仍依賴于AMY測定,由于淀粉酶血癥除見于急性胰腺炎外,還可出現(xiàn)在許多胰外疾病,如腮腺炎、穿孔性潰瘍、腸梗阻、急性膽囊炎、巨淀粉酶血癥、異位妊辰、糖尿病酸中毒、肺炎、急性闌尾炎、支氣管腫瘤和卵巢惡性腫瘤等。使AMY敏感度和特異性受限。有研究報告,淀粉酶測定診斷急性胰腺炎的靈敏度約為70%~95%,特異性僅為33%~34%左右。胰脂肪酶升高的胰腺炎患者中,約20%的患者血清淀粉酶不增高。究其原因主要可能與每位患者的個體狀況、發(fā)病時間、病情輕重程度和檢測時間不同等不同有關(guān)。因此,在患者發(fā)病后應(yīng)盡快測定淀粉酶,尤其是Cam /Ccr比值,并做動態(tài)觀察,可提高診斷的陽性率。
4、AMY升高程度與病情輕重不相關(guān):病情輕者可能很高,病情嚴(yán)重者如暴發(fā)性胰腺炎因腺泡組織受到嚴(yán)重破壞,AMY生成大為減少,測定AMY不升高或升高不明顯。重癥急性胰腺炎的中、重度臟器功能衰竭、全身或局部并發(fā)癥的產(chǎn)生和死亡率均與最初的血清酶水平高低無關(guān)。血清淀粉酶(脂肪酶)輕度升高的患者同樣可存在或發(fā)展為重癥胰腺炎的可能,尤其在血清淀粉酶升高幅度較低的酒精性急性胰腺炎更為如此。

脂肪酶測定

 脂肪酶(lipase)是一種分子量為38KD、低度專一的糖蛋白,是一種水解長鏈脂肪酸甘油酯的酶。脂肪酶的完全催化活性必須有膽鹽及脂肪酶的輔助因子—共脂酶(colipase)參與。共脂肪酶與膽鹽形成復(fù)合物并與底物相依附增加底物與脂肪酶的親和力,促進(jìn)其酶促反應(yīng)。脂肪酶最適pH值因底物和激活劑不同而有變化,一般在pH7~9之間。
 血清中的脂肪酶至少有兩種以上形式,其分子的大小,對離子強(qiáng)度和共脂酶的要求都不同。血清中脂肪酶主要來源于胰腺,其次為胃、小腸和肺等。脂肪酶可以由腎小球?yàn)V過并由腎小管全部回吸收,因此健康人尿中無脂肪酶。
 ㈠ 適應(yīng)癥:①急、慢性胰腺炎,胰腺癌患者。②消化性潰瘍穿孔、腸梗阻、急性膽囊炎等急腹癥和服用膽堿功能藥物等。③急慢性腎臟病。
 ㈡ 標(biāo)本采集:血清或肝素抗凝的血漿。
 ㈢ 檢測方法:測定方法較多,如滴定法、比濁法、乳膠凝集試驗(yàn)、共脂酶膽鹽復(fù)合物酶法等。共脂酶膽鹽復(fù)合物酶法利用脂肪酶作用于特異底物,生成有色產(chǎn)物,顏色的深淺與脂肪酶活性成正比。此法為新近開展,易于標(biāo)準(zhǔn)化。
 ㈣ 參考范圍:<220U/L(酶法, 37℃)。
 ㈤ 臨床意義
1、血清脂肪酶升高
⑴急性胰腺炎發(fā)作后4~8h內(nèi),血清脂肪酶活性升高,24h達(dá)高峰,一般持續(xù)8~14d,其升高程度可達(dá)參考范圍的2~50倍,而且升高比淀粉酶時間早、幅度大、持續(xù)時間長。
⑵ 慢性胰腺炎時,脂肪酶也可增高,但升高幅度不大。
⑶ 脂肪酶升高還可見于消化性潰瘍穿孔、腸梗阻、急性膽囊炎等急腹癥等,脂肪組織破壞、肝炎、肝硬化有時也可增高,但升高幅度不大。
⑷ 急慢、性腎病時血清脂肪酶也可升高。
2、血脂肪酶降低:
⑴在慢性胰腺炎后期,腺泡組織嚴(yán)重破壞,導(dǎo)致進(jìn)入循環(huán)的酶量減少,脂肪酶活性降低。
⑵胰腺癌或結(jié)石引起胰腺導(dǎo)管梗阻,可使血脂肪酶活性降低,但下降的程度取決于梗阻的部位、程度和剩余組織的功能。
3、兒童十二指腸液中脂肪酶過低,提示兒童胰腺囊性纖維化。
㈥ 評價與問題
1、急性胰腺炎時,脂肪酶和淀粉酶多呈平行性改變,脂肪酶的升高一般早于淀粉酶的升高,因此急性胰腺炎時應(yīng)同時測定淀粉酶和脂肪酶。不同的脂肪酶測定方法對胰腺炎的診斷敏感度不同。
2、由于血清脂肪酶的組織來源比淀粉酶少,所以,血清脂肪酶的測定對診斷急性胰腺炎比淀粉酶總量測定具有更高的特異性。
3、由于脂肪酶升高的程度大,持續(xù)時間長,而血清淀粉酶升高的時間短,所以,在急性胰腺炎的后期測定脂肪酶更具臨床意義。
4、腮腺炎和巨淀粉酶血癥時,血脂肪酶不高,故脂肪酶測定對其與急性胰腺炎有鑒別診斷意義。

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