在發(fā)展中國家以及經(jīng)濟欠發(fā)達等衛(wèi)生資源缺乏的地區(qū)，宮頸癌的發(fā)病率與死亡率雖有所減低，但仍遠比發(fā)達國家高。在這些國家和地區(qū)，普遍存在著人口基數(shù)大、衛(wèi)生資源短缺、病理醫(yī)生缺乏，尤其是細胞病理學醫(yī)生嚴重不足，加上經(jīng)濟基礎和經(jīng)費實力不夠的情況，無疑放大了宮頸癌三階梯篩查中第一階梯細胞學篩查業(yè)已存在的問題：
1.不少地區(qū)無奈仍沿用60年代制定的宮頸涂片巴氏染色；
2.TCT/LCT檢測結(jié)果假陰性率較高，容易漏診早期宮頸癌；
3.高倍鏡下尋找細胞的重復性不好，且二次制片時，標本的細胞量漸減；
4.AS-CUS和AGS性質(zhì)未定者，需隨診而易失訪；
5.細胞病理學診斷醫(yī)生奇缺，工作多由組織病理醫(yī)師代替，甚至不少醫(yī)院由體弱多病的婦產(chǎn)科醫(yī)師、護士或檢驗員彌補來完成工作量；
6.缺乏常態(tài)化學習TBS分類法系統(tǒng)的培訓機構(gòu)，細胞病理檢驗師沒有考核準入制；
7.檢測機構(gòu)缺乏定期質(zhì)控及審核檢查機制。
有癌變趨勢或者已經(jīng)癌變的細胞核酸會異常增生（含量增加），核酸改變會遠早于細胞形態(tài)改變。因此，定量分析細胞里面DNA核酸是否改變和改變多少可以直接、簡單、準確判斷細胞是否癌變等原理。正是鑒于此，才有了一種全新的尋找腫瘤細胞的方法——細胞DNA定量分析。
細胞DNA定量分析技術(shù)
細胞DNA定量分析技術(shù)主要通過對細胞核內(nèi)DNA含量或倍體的測定來判斷細胞的生理狀態(tài)和病理改變，目前主要是使用全自動DNA圖像分析系統(tǒng)（DNA-ICM）。對細胞DNA進行定量分析時，具有如下特點：
1.檢測細胞核內(nèi)的相對DNA含量。23對染色體約為7.18pg，但細胞DNA定量分析技術(shù)是檢測細胞核內(nèi)的相對DNA含量，而不是絕對值。在細胞DNA定量分析中，常用c（content）作為單位來衡量DNA的含量。1個c為正常G0/G1細胞DNA含量的一半，故G0/G1細胞為2c細胞（2倍體細胞），而G2/細胞為4c細胞（4倍體細胞）。
2.Feulgen染色使DNA特異性著色。Feulgen染色由Feulgen和Rossenbeck在1924年發(fā)現(xiàn)的一種細胞核內(nèi)DNA染色技術(shù)。染色原理是Schiff試劑（品紅醛試劑，由堿性品紅和亞硫酸鈉配制而成）可以和酸化水解后DNA上的醛基相結(jié)合而顯色。其染色的深淺與DNA的含量成正比。
3.通過測量光密度（灰階）計算被測細胞細胞核的積分光密度值(IOD, integrated optical density)。當被測細胞處于G0/G1期時，其IOD量與正常細胞IOD平均值很接近。
4.用DNA指數(shù)來表示DNA含量。DNA指數(shù)= IOD值（被測細胞DNA）/IOD平均值（正常細胞DNA ）。由于DNA含量是對二維結(jié)構(gòu)測定的，它不完全反映染色體的倍數(shù)，故用DNA指數(shù)來表示DNA含量。當被測細胞處于G0/G1期時，其IOD量與正常細胞IOD平均值很接近，故DNA指數(shù)為1，即為2c。同理，處于S期的細胞，DNA指數(shù)在1~2之間，即2c~4c之間。
5.同一標本的淋巴細胞作為標準對照。由于淋巴細胞內(nèi)DNA含量及形態(tài)較為穩(wěn)定，很多DNA定量細胞學測定淋巴細胞的IOD, 將淋巴細胞DNA作為正常細胞DNA的參照來比較被測細胞的DNA。
6.分析每個細胞的DNA含量，并用DNA直方圖，散點圖顯示標本惡性度。
DNA定量分析能夠?qū)z測的每個細胞的DNA含量進行定量分析，且按細胞DNA含量高低，由高到低自動排序，將核酸含量高的前20個細胞核酸含量值直接報告，高于正常值的即為癌變細胞。對宮頸細胞的檢測實現(xiàn)智能化、標準化、自動化，無需依賴病理醫(yī)生的閱片，能有效彌補細胞學檢查的“三不特性”。
細胞DNA定量分析報告圖
細胞DNA定量分析技術(shù)在宮頸癌篩查中的應用
宮頸細胞的惡變由胞核染色質(zhì)首先改變，高危型HPV的DNA整合到宮頸細胞核DNA上，病毒蛋白E6/E7分別通過與抑癌蛋白P53、RB相作用，干擾中心體合成，紡錘絲缺陷，出現(xiàn)異倍體細胞核，最終才發(fā)展到晚期癌變細胞。這是細胞DNA定量分析技術(shù)可用于宮頸癌篩查的理論依據(jù)，也是全自動DNA圖像分析系統(tǒng)在診斷CIN病變有可能較常規(guī)細胞學敏感的理論基礎。
2001到2004年間，武漢郊區(qū)農(nóng)民使用細胞DNA倍體分析技術(shù)進行宮頸癌篩查，經(jīng)常規(guī)細胞學診斷為宮頸癌和HSIL的病例中, 分別有88%和84%的病例出現(xiàn)異倍體細胞或異倍體細胞峰。而只有53%的 LSIL病例、18%的 ASCUS病例發(fā)現(xiàn)有DNA異培體細胞或異倍體細胞峰。同期開始至2010年，使用細胞DNA定量分析技術(shù)對武漢市漢南區(qū)婦女進行為期10年的宮頸癌篩查情況如下：宮頸癌篩查總?cè)藬?shù)16660人，普及82%育齡婦女，建議做活檢僅3.4 %；堅持10年篩查，近4年，該區(qū)無一例婦女死于宮頸癌。篩查結(jié)果還顯示，異倍體細胞數(shù)與TBS法檢查提示的細胞病變程度呈正比。
細胞DNA倍體分析與TBS結(jié)果的一致性
為解決細胞學篩查技術(shù)諸多不確定因素，目前宮頸癌的初篩方案有單用細胞學、細胞學聯(lián)合HPV分型檢測和單獨HPV分型/不分型檢測。再根據(jù)行陰道鏡之前加或不加分流檢測、以及是否僅采取HPV 16/18的分型檢測構(gòu)成了約10種的宮頸癌篩查策略。
正常女性HPV檢測的陽性率超過10%，感染過HPV的人群實際發(fā)展成宮頸癌的僅為1/5000~7000，若以HPV檢測作為宮頸癌的一線篩查，可能會引用部分正常人群的恐慌，增加就診次數(shù)、加重各級衛(wèi)生機構(gòu)工作量，浪費已經(jīng)緊張的醫(yī)療資源，更糟糕的是增加了患者的心理和經(jīng)濟負擔。
鑒于細胞DNA自動檢測技術(shù)可量化診斷、重復性好、標準質(zhì)控、操作簡單，以及全自動化的五大優(yōu)勢，能有效彌補人工細胞病理閱片主觀性強、重復性差、質(zhì)控困難、工作量大，以及缺讀片員的五大缺陷，將細胞DNA定量分析與TBS診斷互補，將更能輔助婦科醫(yī)生進行更準確更經(jīng)濟的臨床診治。
TCT結(jié)合DAN定量分析臨床指導意義
在病理細胞學醫(yī)師缺乏的地區(qū)，可考慮結(jié)合細胞DNA定量分析和HPV檢測，作為大面積多人群宮頸癌一線篩查的技術(shù)。或者將細胞DNA定量分析單獨作為一線篩查，其結(jié)果及臨床參考意義。
細胞DNA定量分析和HPV結(jié)合的篩查方案
DNA定量分析結(jié)果及臨床意義
將宮頸細胞DNA定量分析取代或聯(lián)合TCT作為宮頸癌一線篩查方案，已經(jīng)有不少省市的篩查中心開始采用。相信在未來我國的宮頸癌細胞DNA倍體檢測應用過程中，該技術(shù)和TCT可同時作為篩查及分流診治的手段。
醫(yī)之云早已把細胞DNA定量分析技術(shù)應用在腫瘤早期篩查上，并與30多家醫(yī)院形成長期穩(wěn)定的合作關系。此外，還承擔了多地的兩癌篩查項目，實現(xiàn)了對宮頸癌的系統(tǒng)化、長效化、精準化預防，在多地得到了事實驗證。從經(jīng)濟模型、民意調(diào)查、疾病控制等多方面都收獲良好口碑。
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