隨著二代測序成本的不斷降低，我們開始更加關注測序數據的質量，而文庫構建過程中數據信息的完整性和穩(wěn)定性則對最終的測序數據質量至關重要。 LGC Biosearch Technologies，擁有9年以上二代測序酶生產經驗的廠商，可以為您提供二代測序建庫流程中所有的關鍵酶，保證您的文庫構建更加精準高效！
二代測序建庫流程
RNA建庫
1
mRNA富集/rRNA去除
Terminator5
熱穩(wěn)定RNA酶H
2
第一鏈cDNA合成
Episcript RNA酶抑制劑
RiboGuard? RNA酶抑制劑
NxGen酶抑制劑
3
第二鏈合成
Klenow DNA聚合酶
4
片段化...
DNA建庫
5
末端修復/加A尾
T4 DNA聚合酶
T4 磷酸激酶
Taq98? DNA聚合酶
6
加接頭
NxGen? T4連接酶
7
純化、上機
相關產品及用途列表
具體產品介紹
1. TerminatorTM 5′-Phosphate-Dependent Exonuclease
特異性水解5′單磷酸RNA（如rRNA）不影響mRNA
富集mRNA，去除rRNA
2. Hybridase? Thermostable RNase H
熱穩(wěn)定RNase H
RNA的選擇性降解(rRNA removal):針對rRNA設計DNA探針，利用熱穩(wěn)定RNase H選擇性切割DNA/RNA雜合鏈，精準去除背景RNA。詳細步驟可參見參考文獻*。
*Morlan JD, Qu K, Sinicropi DV (2012) Selective Depletion of rRNA Enables Whole Transcriptome Profiling of Archival Fixed Tissue. PLoS ONE 7(8): e42882.
3. Episcript逆轉錄酶
可從皮克級別的總RNA中逆轉錄得到長達12kbp 的全長cDNA，無RNase H活性， 適用于長read 的測序儀的文庫構建
4. NxGENTM 及Riboguard RNA酶抑制劑
NxGENTM RNA酶抑制劑為一個豬RNA酶抑制基因(52KDa蛋白)融合了我們專利的22.5 kDa 蛋白標簽；
可抑制 RNase A, RNase B及 RNase C對RNA樣品的影響，保護RNA樣品；
可直接加入RNA樣品，并兼容反轉錄反應；
5. T4 DNA 聚合酶
加A尾前形成DNA平末端
在模板和引物存在的情況下催化5’→3’DNA合成
——5’ 補齊
——DNA 合成（高保真）
包含3’→5’ 外切酶活性
無鏈置換活性
需在75°C熱失活20分鐘
6. NxGen T4 DNA 連接酶
ATP-dependent 酶，連接擁有5′ 磷酸和 3′ 羥基平或粘性末端的雙鏈DNA 分子；
對單鏈核酸無活性；
需在65°C熱失活10分鐘；
7. T4 多核苷酸激酶
5’末端磷酸化酶關鍵酶
可將磷酸集團從ATP轉移到5’ 羥基末端，適用于雙鏈DNA, 單鏈DNA, 雙鏈RNA 及單鏈RNA；
主要應用為5’磷酸化，使DNA或RNA適合于連接反應（在連接酶的作用下連接兩個或更多的DNA或RNA分子）
——NGS 建庫
——Ligation-based PCR assays
需在65°C熱失活20分鐘
8. Taq98? DNA聚合酶
提升DNA 聚合酶加A尾效率
在模板和引物存在的情況下催化5’→3’DNA合成；
具有加A尾活性：
Used in T-A cloning to generate fragments with single 3’ A overhangs
也可用于PCR，比標準Taq DNA 聚合酶具有更強的熱穩(wěn)定性；
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