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RNAlater:徹底告別RNA降解的煩惱
一旦生物樣品被收集采摘,離體組織的RNA會立刻變得非常不穩(wěn)定,極易被降解。由于特異及非特異的RNA降解,或者由于樣品采集過程中的應(yīng)激反應(yīng)產(chǎn)生新的RNA都會引起RNA狀態(tài)的改變。對于生物芯片、基因表達矩陣分析(Array Analysis)、定量RT-PCR等實驗來說,采樣后立即穩(wěn)定樣品里的RNA以保存當時RNA的表達狀態(tài),是精確/定量研究基因表達分析的重要前提。記得以前學(xué)植物遺傳的同學(xué)常常要帶著液氮罐,騎著單車到田里采樣——那個液氮罐的蓋子有點問題,一顛就冒白煙,嚇得一路上行人、車輛紛紛躲避,很是招搖,據(jù)說有一次覺得液氮不夠了,趕著坐出租回來,那可是連哄帶騙才上了的士,到學(xué)校時司機已經(jīng)緊張得面無人色了——這真令貪玩的我們非常羨慕,只恨這等趣事怎么就落不到我們頭上。對當事人來說,每周一次帶著液氮罐到處跑實在不算一種有趣的經(jīng)歷。沒有辦法,為了保持樣品的RNA完整真實,要么當場提RNA,要么液氮保存,一直如此。不過自從有了RNAlater,這種有趣的場面就會越來越少了。

    RNAlater是特殊的樣品儲存液,只要在采樣后立即將新鮮樣品浸入這種液體試劑,RNlater可以迅速滲透到組織或其他生物樣本中,穩(wěn)定并保護RNA完整而不被降解,確保下游分析得到的數(shù)據(jù)真實反應(yīng)樣品的表達信息。樣品儲存液中保存的新鮮樣品可以在不超過37度的高溫天氣下保存一天,或者在25度室溫下保存一周;或者4度冰箱存放一個月;或者負20度長期保存而使RNA保持完整免受降解。這種技術(shù)為在不同溫度和不同地點下的采樣、運輸和保存樣品提供了極大的方便,同樣適合手術(shù)/解剖過程中部分樣品的保存。

    RNAlater的用法非常簡單,只要在采樣后立即將樣品完全浸入適量(10ul/1mg組織或者5倍體積)的RNAlater中即可。取樣的動作要盡量快速利索,組織樣品的大小以厚度不超過0.5公分為宜。對于一些小的組織如小鼠的脾、腎等器官則可以整個取出浸入溶液中,較大的則應(yīng)切開為厚度小于0.5公分的小塊,以確保RNAlater 能迅速擴散滲透入組織塊中的所有細胞中。采樣的容器應(yīng)該足夠大以容納10倍于組織重量的溶液,避免組織塊擠在一起,同時建議將溶液加滿容器以避免在運輸過程中組織塊露出液面。

    RNAlater還可以直接加入到離心收集的細胞團甚至加入正在培養(yǎng)的細胞中。保存后的樣品可以直接用于RNA或者mRNA的抽提。RNAlater不會影響組織塊的結(jié)構(gòu),可以在室溫下切出適量的組織塊用于稱量和抽提RNA,剩下的部分可用于繼續(xù)保存樣品。-20度凍存的樣品可以取出在室溫下進行稱量等操作而無需干冰。在-20度凍存的樣品反復(fù)凍融20次RNA依然保持完好無損。RNAlater處理過的樣品比新鮮組織稍微硬一點,但不會影響RNA純化過程。待要抽提RNA時只要將組織塊取出直接加裂解Buffer、或者研磨、或者勻漿化,或者凍融處理就行,就像新鮮組織一樣,而不用擔心RNase,因為它們已經(jīng)失活了。即使是脾臟這樣RNase含量極為豐富、通常很難提到完整RNA的組織也能得到很好的結(jié)果。

    很重要的一點是,RNAlater可以配合各種常見的RNA抽提試劑盒使用,例如QIAGEN的RNeasy系列、LTI/GIBCO的TRIzol、Ambion的RNAwiz、RNAzol、TRI以及利用Oligo(dT)原理的mRNA抽提試劑盒,還有酚抽法。有些用戶說RNAlater甚至可以加入裂解液中而不影響結(jié)果。

    RNAlater適用于各種哺乳動物組織、植物、爪蟾、魚類、果蠅、大腸桿菌和培養(yǎng)細胞。注意:本試劑只適用于新鮮樣品,對于已經(jīng)冷藏和包埋的樣品直接抽提RNA即可。另外對于RNA已經(jīng)降解的樣品,RNAlater只能保護剩下的樣品RNA,不能修復(fù)已破壞的RNA。本試劑也不適用于全血或體液中RNA的保存,全血樣本請參見PAXGENE system。RNAlater TissueProtect Tubes是預(yù)先分裝好RNAlater試劑的保存管,使用更加簡單。RNeasy Protect Kit則提供一整套RNA保護和分離試劑,從樣品的保存到RNA的抽提,只需一個試劑盒即可解決所有問題。保證樣品的表達信息不受破壞,確保得到可信的基因表達分析結(jié)果。

生物通年度明星產(chǎn)品
推薦理由:

· 快速有效地將RNA固定保存在生物樣本中,為基因表達分析等后續(xù)工作提供可靠的原材料
· 無需液氮或干冰,方便安全地在室溫下保存樣本,低溫可長期保存
· 低溫保存時即使反復(fù)凍融也不會導(dǎo)致RNA降解
· 進行后續(xù)操作只需從保存液中將樣本取出即可
· 對細菌樣本有專用的RNAprotect Bacteria Reagent
· 可單獨選購RNAlater,也可購買完整RNAprotect試劑盒,包含RNAlater和純化試劑

保存在RNAlater中的樣品RNA可以:
· 37℃下穩(wěn)定保存1天
· 18-25℃保存7天
· 2-8℃穩(wěn)定4周
· -20℃永久保存

-Immediate RNA stabilization and protection in biological samples to ensure reliable gene-expression and gene-profiling data
-Convenient and safe handling with innovative RNAlater™ stabilization at room temperature — no need for liquid nitrogen or dry ice
-Archived biological samples can go through multiple freeze–thaw cycles without risk of RNA degradation
-Easy, fast, and reliable RNA isolation — ready-to-use RNA for all downstream applications

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