全球新冠肺炎確診人數(shù)已突破230萬，面對(duì)復(fù)雜的國際疫情形勢(shì)，防控依然嚴(yán)峻，“外防輸入，內(nèi)防擴(kuò)散”仍然是未來一段時(shí)期的重要工作，復(fù)工、復(fù)產(chǎn)、復(fù)學(xué)帶來的潛在風(fēng)險(xiǎn)也不容小覷，所以新冠肺炎核酸和特異性抗體檢測(cè)工作仍將持續(xù)，由于這兩種方法的檢測(cè)原理完全不同，因此在臨床分析中應(yīng)充分考慮方法學(xué)引入的問題，本文就核酸和抗體檢測(cè)做一簡(jiǎn)單闡述，以期為臨床提供診療思路。
檢測(cè)原理
核酸：多數(shù)采用熒光定量PCR方法。檢測(cè)原理是以病毒獨(dú)特的基因序列為靶標(biāo)，通過PCR擴(kuò)增，使我們選擇的這段靶標(biāo)DNA序列指數(shù)級(jí)增加，每一個(gè)擴(kuò)增出來的DNA序列，都可與預(yù)先加入的熒光標(biāo)記探針結(jié)合，產(chǎn)生熒光信號(hào)，擴(kuò)增出來的靶基因越多，累積的熒光信號(hào)就越強(qiáng)。而沒有病毒的樣本中，由于沒有靶基因擴(kuò)增，因此就檢測(cè)不到熒光信號(hào)增強(qiáng)。所以，核酸檢測(cè)，其實(shí)就是通過檢測(cè)熒光信號(hào)的累積來確定樣本中是否有病毒核酸。
抗體：抗體是機(jī)體免疫細(xì)胞被抗原激活后，由分化成熟的B細(xì)胞（即漿細(xì)胞）所合成和分泌的一類能與相應(yīng)抗原特異性結(jié)合的具有免疫功能的球蛋白?？贵w可分為五類：IgM、IgG、IgA、IgE和IgD，其中臨床主要檢測(cè)的是IgM和IgG抗體。IgM抗體多在發(fā)病3～5天后開始出現(xiàn)陽性，1-2周達(dá)峰值，隨后逐漸降低。IgG抗體則晚于lgM出現(xiàn),發(fā)病4周左右達(dá)到峰值,并維持較長時(shí)間。
檢測(cè)方法
核酸：實(shí)時(shí)熒光RT-PCR檢測(cè)
抗體：化學(xué)發(fā)光法、酶聯(lián)免疫法、膠體金法
優(yōu)缺點(diǎn)
核酸檢測(cè)：
優(yōu)點(diǎn)：核酸檢測(cè)的陽性預(yù)測(cè)值可達(dá)100%，也就是說核酸檢測(cè)的假陽性率極低。
缺點(diǎn)：
1、采樣部位影響檢測(cè)結(jié)果，新冠病毒在下呼吸道及肺部病毒載量最高，進(jìn)行咽拭子采樣可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果的出現(xiàn)。
2、采樣時(shí)機(jī)影響檢測(cè)結(jié)果，患者出現(xiàn)癥狀后第一周內(nèi)唾液病毒載量最高，其后隨著時(shí)間，病毒載量逐步下降；
3、采樣人員的技術(shù)直接影響檢測(cè)結(jié)果；
4、試劑的質(zhì)量影響檢測(cè)結(jié)果。
抗體檢測(cè)：
優(yōu)點(diǎn)：具有采樣方便（靜脈血）、檢測(cè)效率高（檢測(cè)周期短）的特點(diǎn)；
缺點(diǎn)：
1、抗體檢測(cè)的窗口期問題（病毒進(jìn)入機(jī)體到機(jī)體產(chǎn)生特異性的抗體需要一段時(shí)間）；
2、不同試劑廠家檢測(cè)試劑盒的靈敏度不一，抗體靶點(diǎn)不同可能出現(xiàn)結(jié)果不一致的情況；
3、血液標(biāo)本中的某些干擾物質(zhì)可能導(dǎo)致抗體檢測(cè)的假陽性、假陰性的問題。
4、抗原交叉反應(yīng)對(duì)新型冠狀病毒血清特異性抗體檢測(cè)的影響問題。
結(jié)果判讀
核酸 | 抗體 | 臨床提示 | |
IgM | IgG | ||
陰性 | - | - | 無感染者或感染潛伏期，需詢問接觸史 |
± | - | 干擾致結(jié)果假陽性或初次感染病毒載量極低并處于早期，結(jié)合胸部CT診斷 | |
+ | - | 存在干擾致結(jié)果假陽性或感染急性期，核酸結(jié)果假陰性，需結(jié)合胸部CT診斷 | |
- | + | 既往感染，病毒已清除，處于恢復(fù)期或已康復(fù)，IgG可在體內(nèi)長期存在，結(jié)合胸部CT排除 | |
+ | + | 提示近期感染，核酸結(jié)果假陰性，結(jié)合胸部CT診斷或提示處于恢復(fù)期，IgM尚未消失 | |
陽性 | - | - | 感染“窗口期”，體內(nèi)尚未產(chǎn)生抗體，或免疫抑制劑治療、免疫缺陷性疾病導(dǎo)致不產(chǎn)生抗體 |
+ | - | 感染早期，IgM可以在癥狀發(fā)生3～5天后產(chǎn)生 | |
- | + | 感染中晚期且病毒尚未清除 | |
+ | + | 感染癥狀期，或感染活躍期，或再次復(fù)發(fā)感染 | |
我們?cè)趺催x？
隨著疫情的發(fā)展，多次核酸檢測(cè)陰性，但最終被確診為新冠肺炎的患者出現(xiàn)，以及癥狀完全緩解的患者在核酸檢測(cè)陰性后再次轉(zhuǎn)為陽性等，提示除核酸檢測(cè)外我們應(yīng)該選擇更多的檢測(cè)方式進(jìn)行互補(bǔ)，通過以上分析我們可以看出核酸檢測(cè)是病毒存在的直接證據(jù)，而抗體檢測(cè)則是間接證據(jù)，但兩種方法同時(shí)存在其優(yōu)缺點(diǎn)，有研究資料顯示，病毒載量與血清抗體反應(yīng)成反比，因此血清抗體檢測(cè)可以作為核酸檢測(cè)的有益補(bǔ)充，在決定感染控制措施時(shí)應(yīng)同時(shí)考慮連續(xù)的病毒載量監(jiān)測(cè)和抗體反應(yīng)。所以核酸與抗體結(jié)合檢測(cè)更占優(yōu)勢(shì)。
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