血瘀證作為一種基本證候,存在于臨床多種疾病的發(fā)生、發(fā)展過程中。從現(xiàn)代醫(yī)學(xué)角度來看,一些臨床常見的疾病,如高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化、糖尿病和腫瘤等均存在血小板活化、血管內(nèi)皮功能障礙、炎癥與氧化應(yīng)激等血瘀相關(guān)現(xiàn)象。<br> 一氧化氮具有廣泛的生理和病理效應(yīng)。在血管內(nèi)皮細(xì)胞和血小板中維持生理濃度的一氧化氮合成有助于調(diào)節(jié)血管張力、抑制血小板活化;超氧陰離子與一氧化氮結(jié)合會(huì)降低一氧化氮的生物利用度,促進(jìn)血小板活化和內(nèi)皮功能障礙;過量表達(dá)的一氧化氮主要發(fā)揮細(xì)胞毒性和蛋白質(zhì)修飾作用,能引起相關(guān)炎癥通路的活化,進(jìn)而促進(jìn)血小板聚集。因此維系生理濃度一氧化氮的良性調(diào)節(jié)作用,抑制過量一氧化氮對(duì)機(jī)體的損傷,對(duì)維持血管內(nèi)環(huán)境平衡具有非常重要的意義。<br> 目前阿司匹林仍是國際上最常用的抗血小板藥物。2010年美國心臟病協(xié)會(huì)通過循證醫(yī)學(xué)數(shù)據(jù)證明,作用于一氧化氮通路的磷酸二酯酶抑制劑與阿司匹林相比更具優(yōu)勢(shì),對(duì)二次中風(fēng)的預(yù)防更安全、更有效。<br> 目的:<br> 本研究以阿司匹林為陽性對(duì)照藥,對(duì)本中心中藥提取物標(biāo)準(zhǔn)庫中具有抗炎或舒張血管作用的38種中藥提取物進(jìn)行了抗血小板聚集篩選;針對(duì)中藥多層次、多靶點(diǎn)的作用特點(diǎn),進(jìn)一步考察了4種有效提取物對(duì)血小板活化、血管舒張、炎癥和抗氧化等方面的作用;最終系統(tǒng)探討了藤梨根提取物對(duì)血小板一氧化氮通路相關(guān)靶點(diǎn)的調(diào)節(jié)作用。<br> 方法：<br> 1.以二磷酸腺苷(ADP)、膠原和花生四烯酸為誘導(dǎo)劑,用Born比濁法檢測(cè)38種中藥提取物或單體對(duì)大鼠體外血小板聚集的影響。<br> 2.根據(jù)初篩結(jié)果,對(duì)部分有效提取物的作用環(huán)節(jié)進(jìn)行了深入探討:利用微孔板比色法檢測(cè)了有效提取物對(duì)血小板粘附的影響;通過透射電鏡觀察了血小板超微結(jié)構(gòu)的變化;同時(shí)考察了藥物對(duì)凝血酶、血小板活化因子誘導(dǎo)的兔體外血小板聚集的影響。檢測(cè)了不同提取物對(duì)內(nèi)皮完整或去除內(nèi)皮后離體血管張力變化的影響。以LPS和INF-γ聯(lián)合刺激巨噬細(xì)胞后引起iNOS活化,產(chǎn)生過量一氧化氮,檢測(cè)藥物處理后細(xì)胞培養(yǎng)上清液中亞硝酸鹽含量的變化;采用FRAP法檢測(cè)了中藥提取物的直接抗氧化能力。<br> 3.以藤梨根提取物良好的調(diào)節(jié)血管張力和抗血小板聚集作用為基礎(chǔ),通過Westernblot、放射免疫法檢測(cè)了蛋白磷酸化和環(huán)核苷酸水平,探討了藤梨根提取物對(duì)血小板內(nèi)一氧化氮通路相關(guān)靶點(diǎn)的影響。<br> 結(jié)果：<br> 1.初篩結(jié)果顯示,16種中藥提取物或單體對(duì)ADP、花生四烯酸或膠原誘導(dǎo)的大鼠體外血小板聚集有不同程度的抑制作用,與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05或0.01)。<br> 2.藤梨根提取物(TSRA)可以濃度依賴性抑制凝血酶誘導(dǎo)的兔洗滌血小板聚集(P＜0.05)和血小板粘附;對(duì)活化血小板超微結(jié)構(gòu)的影響主要表現(xiàn)為維持細(xì)胞膜穩(wěn)定,減少血小板內(nèi)顆粒釋放(P＜0.01);藤梨根提取物對(duì)離體主動(dòng)脈環(huán)具有濃度依賴性舒張作用,該作用可以被L-NAME和ODQ阻斷(P＜0.05或0.01);藤梨根提取物還具有良好的直接抗氧化能力,對(duì)巨噬細(xì)胞活化后過量NO產(chǎn)生無抑制作用。<br> 藤梨根的主要化學(xué)成分包括熊果酸、大黃素和大黃素甲醚等。本研究檢測(cè)了這三種單體成分對(duì)血小板聚集、粘附和超微結(jié)構(gòu)的影響。結(jié)果顯示,大黃素和大黃素甲醚可顯著抑制ADP誘導(dǎo)的大鼠體外血小板聚集和活化血小板脫顆?，F(xiàn)象(P＜0.05或0.01),大黃素對(duì)凝血酶誘導(dǎo)的血小板粘附抑制率達(dá)38.54％,對(duì)巨噬細(xì)胞活化后亞硝酸鹽的產(chǎn)生也有顯著抑制作用(P＜0.05)。熊果酸對(duì)血小板聚集無任何抑制作用。<br> 機(jī)制探討:藤梨根提取物對(duì)血小板聚集的抑制作用可以被L-NAME阻斷,ODQ僅能減弱而非完全阻斷該作用。低濃度Foskolin與低濃度藤梨根提取物聯(lián)用后能顯著抑制血小板聚集。血小板的eNOS活性主要由蛋白磷酸化調(diào)節(jié),Western blot結(jié)果顯示藤梨根提取物可以時(shí)間依賴性促進(jìn)eNOS-Ser1177位點(diǎn)的蛋白磷酸化表達(dá),在藥物處理10 min時(shí)達(dá)到峰值。eNOS活化后促進(jìn)NO的生成,藤梨根提取物處理血小板15 min后能在一定程度上促進(jìn)血小板源NO水平升高,該作用在ADP刺激下或隨著處理時(shí)間的延長而顯著增強(qiáng)。藤梨根提取物對(duì)凝血酶刺激的血小板內(nèi)cGMP水平有顯著的升高作用,同時(shí)不影響cAMP水平。藤梨根提取物還能促進(jìn)cGMP下游VASP蛋白磷酸化的表達(dá)。<br> 3.桑枝提取物具有良好的藥理活性,但不同提取部位的作用側(cè)重點(diǎn)不盡相同。桑枝提取物-1(黃酮含量50.24％)和桑枝提取物-2(醇提物經(jīng)正丁醇萃取,過D101大孔樹脂,70％乙醇洗脫部位)對(duì)巨噬細(xì)胞活化后過量NO的產(chǎn)生具有顯著的抑制作用(P＜0.01),但均不能引起離體主動(dòng)脈環(huán)舒張或抑制血小板聚集;桑枝提取物-3(主要是生物堿成分)的作用與之相反,對(duì)ADP、花生四烯酸和膠原誘導(dǎo)的大鼠體外血小板聚集(P＜0.05或0.01)有良好的濃度依賴性抑制作用。1-脫氧野尻霉素(1-DNJ)是桑枝生物堿的主要成分,但實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,1-DNJ并不具備抗血小板聚集的作用。<br> 4.苦參素對(duì)ADP、花生四烯酸和血小板活化因子誘導(dǎo)血小板聚集的抑制與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),該作用不能被L-NAME和ODQ阻斷,但苦參素能顯著促進(jìn)低濃度磷酸二酯酶抑制劑IBMX的抗聚集作用。苦參素維持血小板超微結(jié)構(gòu)穩(wěn)定主要表現(xiàn)為顯著抑制ADP引起的血小板內(nèi)致密顆粒釋放(P＜0.01)和維持細(xì)胞膜完整。<br> 5.芫花提取物能顯著抑制花生四烯酸和凝血酶誘導(dǎo)的大鼠體外血小板聚集(P＜0.05或0.01),該作用不能被L-NAME和ODQ阻斷。芫花提取物對(duì)內(nèi)皮完整或去除內(nèi)皮的離體血管環(huán)均有明顯的舒張作用。<br> 芹菜素是芫花的單體成分之一。芹菜素能顯著抑制花生四烯酸誘導(dǎo)的血小板聚集和TXA2生成,對(duì)活化巨噬細(xì)胞過量NO的產(chǎn)生也有顯著的抑制作用。芹菜素對(duì)血小板聚集和巨噬細(xì)胞活化的抑制效果與芫花提取物相似,這提示芫花提取物的抗聚集作用可能與抑制花生四烯酸代謝有關(guān)。<br> 結(jié)論：<br> 本文對(duì)具有抗炎或擴(kuò)張血管作用的38個(gè)中藥提取物進(jìn)行抗血小板聚集作用篩選,得到16種有效提取物,其中7種對(duì)血小板聚集的抑制作用未見報(bào)道;<br> 苦參素、芫花提取物、桑枝提取物-3(生物堿成分)、藤梨根提取物可以從多途徑抑制血小板活化,同時(shí)具有舒張血管或抑制過量NO產(chǎn)生的作用;苦參素與IBMX有協(xié)同增效作用;桑枝提取物-3(生物堿成分)和芫花提取物對(duì)血瘀證相關(guān)指標(biāo)的調(diào)節(jié)主要與抑制花生四烯酸代謝通路有關(guān);藤梨根提取物舒張血管和對(duì)血小板功能的抑制主要與一氧化氮信息系統(tǒng)有關(guān)。
本站僅提供存儲(chǔ)服務(wù)，所有內(nèi)容均由用戶發(fā)布，如發(fā)現(xiàn)有害或侵權(quán)內(nèi)容，請(qǐng)
點(diǎn)擊舉報(bào)。
