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1．概念：在無(wú)菌和人工控制的條件下，將離體的植物器官、組織、細(xì)胞，培養(yǎng)在人工配制的固體培養(yǎng)基（瓊脂）上，給予適宜的培養(yǎng)條件，誘導(dǎo)其產(chǎn)生愈傷組織、叢芽，最終形成完整的植株。

2．過(guò)程：

【注意】

☆取材部位是形成層：因?yàn)?/span>分化程度低容易誘導(dǎo)。

☆愈傷組織特點(diǎn)：排列疏松無(wú)規(guī)則、高度液泡化、無(wú)定形態(tài)、薄壁細(xì)胞。

☆培養(yǎng)基——高壓蒸汽滅菌；外植體——70％酒精消毒。

☆培養(yǎng)條件：

（1）溫度、pH、滲透壓。

（2）營(yíng)養(yǎng)：蔗糖（提供能源，調(diào)節(jié)滲透壓）等。

（3）激素：生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素。其比值高時(shí)利于生根，低時(shí)利于生芽；先用生長(zhǎng)素，后用細(xì)胞分裂素，利于細(xì)胞分裂，細(xì)胞不分化，先用細(xì)胞分裂素，后用生長(zhǎng)素，細(xì)胞既分裂也分化。

（4）光照：不同植物在不同階段，對(duì)光強(qiáng)、光質(zhì)、光周期要求不同。

3．原理：植物細(xì)胞的全能性

4．用途：

（1）微型繁殖：保持優(yōu)良品種的遺傳特性，可以高效快速地實(shí)現(xiàn)種苗的大量繁殖

（2）作物脫毒：采用莖尖組織培養(yǎng)來(lái)除去病毒（因?yàn)橹参?/span>分生區(qū)附近的病毒極少或沒(méi)有）

（3）人工種子：以植物組織培養(yǎng)得到的胚狀體、不定芽、頂芽和腋芽等為材料，經(jīng)人工薄膜包裝得到的種子。優(yōu)點(diǎn)：保持優(yōu)良品種的遺傳特性，不受季節(jié)氣候和地域的限制，節(jié)約土地

（4）單倍體育種：首先，通過(guò)花藥離體培養(yǎng)得到單倍體植株，再對(duì)單倍體幼苗進(jìn)行秋水仙素處理；得到了正常的純合二倍體植株（可育、純合子不發(fā)生性狀分離)，優(yōu)點(diǎn)：明顯縮短育種年限

（5）突變體利用：在組織培養(yǎng)過(guò)程中，由于細(xì)胞不斷的處于分生狀態(tài)，所以容易出現(xiàn)突變體，于是可以篩選出有用的突變體來(lái)培育新品種。

（6）細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)：通過(guò)對(duì)能夠產(chǎn)生對(duì)人們有用的產(chǎn)物的細(xì)胞進(jìn)行組織培養(yǎng)，從而得到細(xì)胞產(chǎn)物。有些細(xì)胞產(chǎn)物只需要培養(yǎng)到愈傷組織即可。

【思考】植物組織培養(yǎng)屬于克隆（無(wú)性繁殖）嗎？

1．過(guò)程：先植物細(xì)胞融合（原理為細(xì)胞膜的流動(dòng)性），再植物組織培養(yǎng)(原理為植物細(xì)胞的全能性)

2．誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合的方法：物理法包括離心、振動(dòng)、電激等；化學(xué)法一般是用聚乙二醇（PEG）作為誘導(dǎo)劑。

3．意義：克服了遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙，大大擴(kuò)展雜交的親本組合范圍。

4．不足：沒(méi)有完全按照人們的意愿表達(dá)出雙親的優(yōu)良性狀。

5．融合成功的標(biāo)志是：雜種細(xì)胞再生出細(xì)胞壁，與高爾基體有關(guān)。核融合后的DNA數(shù)和染色體數(shù)、染色體組數(shù)均采取加法，會(huì)出現(xiàn)異源多倍體。再生細(xì)胞壁之前注意培養(yǎng)基的滲透壓。

6．由于植物細(xì)胞有細(xì)胞壁，所以在融合之前要用纖維素和果膠酶去壁，得到球形的原生質(zhì)體。

1．概念：動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)就是從動(dòng)物機(jī)體中取出相關(guān)的組織，將它分散成單個(gè)細(xì)胞，然后放在適宜的培養(yǎng)基(液體)中，讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。(不能變成個(gè)體；原理是細(xì)胞增殖)。

2．流程：取幼齡動(dòng)物組織塊剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個(gè)細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中進(jìn)行原代培養(yǎng)→細(xì)胞貼壁→接觸抑制→重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理→分瓶繼續(xù)傳代培養(yǎng)。【思考】該過(guò)程可以用胃蛋白酶嗎？

3．細(xì)胞傳至10～50代左右時(shí)，增殖逐漸停止，但部分發(fā)生變異的細(xì)胞，獲得不死性。故如果想保持正常的二倍體核型通常在10代以內(nèi)。

4．細(xì)胞貼壁：懸液中分散的細(xì)胞很快就貼附在瓶壁上，稱為細(xì)胞貼壁。培養(yǎng)貼附性細(xì)胞時(shí),細(xì)胞要貼附于底物上才能生長(zhǎng)增值。

5．接觸抑制：細(xì)胞數(shù)目不斷增多，當(dāng)貼壁細(xì)胞分裂生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，細(xì)胞就會(huì)停止分裂增殖。

【思考】癌細(xì)胞有接觸抑制和細(xì)胞貼壁現(xiàn)象嗎？

6．條件：

（1）無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境：培養(yǎng)液應(yīng)進(jìn)行無(wú)菌處理。通常還要在培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防培養(yǎng)過(guò)程中的污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止代謝產(chǎn)物積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。

（2）營(yíng)養(yǎng)：合成培養(yǎng)基（糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、微量元素等）加入血清、血漿等天然成分（因?yàn)槿藗儗?duì)細(xì)胞所需的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)還沒(méi)有完全搞清楚）

（3）溫度和pH：哺乳動(dòng)物的適宜溫度多是36.5℃±0.5℃；多數(shù)細(xì)胞生存的適宜pH：7.2～7.4

（4）氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO₂ 。O₂ 是細(xì)胞代謝所必需的，CO₂ 的主要作用是維持培養(yǎng)液的pH

7．應(yīng)用：早期胚胎培養(yǎng)、皮膚移植材料的培育、制備單克隆抗體、檢測(cè)有毒物質(zhì)、培養(yǎng)醫(yī)學(xué)研究的各種細(xì)胞。

1．哺乳動(dòng)物核移植可以分為胚胎細(xì)胞核移植（比較容易）和體細(xì)胞核移植（比較難）。

2．體細(xì)胞核移植的大致過(guò)程是：

【思考】是百分百的克隆嗎?

答案：不是。提示：細(xì)胞質(zhì)遺傳，環(huán)境影響基因表達(dá)，基因突變等

3．選用去核卵母細(xì)胞的原因：卵母細(xì)胞體積大，容易操作；細(xì)胞質(zhì)多，營(yíng)養(yǎng)豐富；含有激發(fā)細(xì)胞核全能性的物質(zhì)。

4．原理：高度分化的動(dòng)物細(xì)胞核有全能性。

5．應(yīng)用：加速家畜遺傳改良進(jìn)程，促進(jìn)優(yōu)良畜群繁育；保護(hù)瀕危物種；生產(chǎn)珍貴的醫(yī)用蛋白；作為異種移植的供體；用于組織器官的移植等。

6．存在的問(wèn)題：克隆動(dòng)物存在著健康問(wèn)題、表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷等。

1．動(dòng)物細(xì)胞融合：也稱細(xì)胞雜交，是指兩個(gè)或多個(gè)動(dòng)物細(xì)胞結(jié)合形成一個(gè)細(xì)胞的過(guò)程。融合后形成的具有原來(lái)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞遺傳信息的單核細(xì)胞，稱為雜交細(xì)胞（不能變成個(gè)體，原理為細(xì)胞膜的流動(dòng)性）。

【思考】動(dòng)物細(xì)胞雜交用到胰蛋白酶嗎？

2．動(dòng)物細(xì)胞融合方法：與植物原生質(zhì)體融合的方法基本相同，常用誘導(dǎo)因素除聚乙二醇、電激外還有滅活的病毒。

3．意義：突破有性雜交方法的局限，使遠(yuǎn)緣雜交成為可能。

1．過(guò)去如何獲得抗體：向動(dòng)物體內(nèi)反復(fù)注射抗原，從血清中分離抗體（產(chǎn)量低、純度低、特異性差）

2．單克隆抗體的制備過(guò)程：

3．雜交瘤細(xì)胞的特點(diǎn)：既能大量繁殖，又能產(chǎn)生專一的抗體。

4．單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)：特異性強(qiáng)，靈敏度高，并能大量制備。

5．單克隆抗體的作用：作為診斷試劑：準(zhǔn)確識(shí)別各種抗原物質(zhì)的細(xì)微差異，并跟一定抗原發(fā)生特異性結(jié)合，具有準(zhǔn)確、高效、簡(jiǎn)易、快速的優(yōu)點(diǎn)。用于治療疾病和運(yùn)載藥物：主要用于治療癌癥治療，可制成“生物導(dǎo)彈”。