作為穩(wěn)定性研究重要組成部分之一的影響因素試驗(yàn)，在藥品研發(fā)過程中如處方組成合理性評價(jià)、質(zhì)量研究中分析方法的可行性判斷、上市藥品包裝材料的選擇和貯藏條件的確定等方面起著重要作用。因此國內(nèi)外藥物指導(dǎo)原則中都有關(guān)于影響因素試驗(yàn)的要求。人用藥品注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會(ICH)。規(guī)定了光照試驗(yàn)等具體詳細(xì)方法；美國FDA對凍融試驗(yàn)等提出建議?！吨袊幍洹芬?guī)定了高溫、高濕等影響因素試驗(yàn)的方法。但目前研發(fā)者對影響因素試驗(yàn)的重要性認(rèn)識不到位，甚至被忽視，如有的研發(fā)者把影響因素試驗(yàn)當(dāng)成了作業(yè)式的任務(wù)而去完成，目的不明確；有的研發(fā)者對影響因素內(nèi)容不甚了解，如在什么情況下應(yīng)該進(jìn)行凍融試驗(yàn)、配伍試驗(yàn)；更有的認(rèn)為申報(bào)已有國家標(biāo)準(zhǔn)的藥品不需要進(jìn)行影響因素試驗(yàn)等。由于存在這些不正確、不合理的認(rèn)識，使研發(fā)工作不到位，如處方組成不合理，加速試驗(yàn)、長期試驗(yàn)設(shè)計(jì)不科學(xué)等，給研發(fā)和審評帶來資源上的浪費(fèi)和損失。因此，為了使研發(fā)者對影響因素試驗(yàn)的意義有充分的理解和認(rèn)識，筆者結(jié)合審評工作的體會，基于影響因素的目的，闡述影響因素試驗(yàn)在化學(xué)藥物(包括原料藥和制劑)研發(fā)過程中的作用，著重分析目前已有制劑申報(bào)資料中經(jīng)常存在的問題，并對影響因素試驗(yàn)過程中的部分共性問題進(jìn)行集中討論，以期給研發(fā)者有所參考。
1影響因素試驗(yàn)的目的和類別
影響因素試驗(yàn)是在劇烈條件下進(jìn)行的，其目的是了解影響藥物穩(wěn)定性的因素及可能的降解途徑和降解產(chǎn)物，為制劑?。核嚨暮Y選、包裝材料和容器的選擇、貯存條件的確定等提供依據(jù)。同時(shí)為加速試驗(yàn)和長期試驗(yàn)應(yīng)采用的溫度和濕度等條件提供依據(jù)，還可為分析方法的選擇提供依據(jù)。
影響因素試驗(yàn)除了通常進(jìn)行的高溫、高濕和光照3個(gè)試驗(yàn)外，必要時(shí)基于藥物性質(zhì)、劑型特點(diǎn)、臨床用途等，還要進(jìn)行凍融試驗(yàn)、配伍試驗(yàn)，低濕試驗(yàn)，還要考察pH值、氧、低溫等試驗(yàn)對藥物質(zhì)量的影響。影響因素各種試驗(yàn)均是從不同的角度、不同的層面考察和探討藥物的穩(wěn)定性，保證上市藥品的質(zhì)量穩(wěn)定。
2影響因素試驗(yàn)的作用和申報(bào)資料存在問題分析
2.1影響因素試驗(yàn)的作用
基于影響因素試驗(yàn)?zāi)康?，它主要有以下幾個(gè)方面的作用。
2.1.1可以了解藥物固有的穩(wěn)定性
眾所周知，原料藥進(jìn)行影響因素試驗(yàn)可以了解和獲悉原料藥對于光、熱、濕的穩(wěn)定性信息。對于制劑來說，同樣可以了解原料藥制劑后的穩(wěn)定性，如乳膏劑中的輔料對主藥的保護(hù)程度，是否需要避光等信息。但制劑的影響因素試驗(yàn)又區(qū)別于原料藥，常見的高溫、高濕或光照試驗(yàn)對于部分制劑可能沒有太大的實(shí)際意義，如小水針劑本身為水溶液，帶著玻璃安瓿包裝進(jìn)行高濕試驗(yàn)沒有意義，去了包裝考察高濕更沒有意義；乳膏本身為半固體制劑，沒有必要進(jìn)行除去內(nèi)包裝的高濕試驗(yàn)。
2.1.2可以為處方工藝的篩選提供依據(jù)，驗(yàn)證處方組成的合理性，生產(chǎn)工藝的可行性和穩(wěn)定性
原料藥自身穩(wěn)定性特點(diǎn)在一定程度上決定了藥物的劑型，同時(shí)也決定了制劑的處方組成和生產(chǎn)工藝條件參數(shù)。例如，對于易氧化的原料藥，制劑時(shí)通常需加人抗氧劑或需通氮?dú)獬酰粚λ釅A敏感的原料藥，需確定合適的pH值范圍；對溫度敏感的原料藥，需選擇合適的滅菌方法和滅菌條件；特別是通過影響因素試驗(yàn)可以考察新處方主藥與輔料之間是否發(fā)生了相互作用，以及輔料之間是否發(fā)生了相互作用等。
2.1.3可以選擇合理的包裝材料和容器，確定初步的貯藏條件
影響因素試驗(yàn)可以了解制劑受光、熱、濕、氧等因素的影響程度，從而根據(jù)制劑的穩(wěn)定性，選擇和確定包裝、貯藏條件，保證藥品質(zhì)量的穩(wěn)定性。如對光敏感的制劑應(yīng)采用能避光的材料制成內(nèi)包裝，并在暗處貯藏；對高溫敏感的藥物，在貯藏過程中應(yīng)避免接觸到高溫。
2.1.4為加速試驗(yàn)和長期試驗(yàn)條件的確定提供依據(jù)
如果影響因素試驗(yàn)結(jié)果表明，制劑在高溫60，40℃條件下樣品發(fā)生顯著變化，那么加速試驗(yàn)的考察溫度不應(yīng)采用常規(guī)的40℃條件而應(yīng)適當(dāng)降低溫度，長期試驗(yàn)溫度也應(yīng)作相應(yīng)調(diào)整。如通過影響因素試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)注射用克拉維酸鉀對溫度敏感，那么有的研發(fā)者加速試驗(yàn)采用25℃、長期試驗(yàn)采用6℃，具有一定的合理性。
2.1.5可以了解藥物可能的降解途徑和降解產(chǎn)物，為分析方法的選擇提供依據(jù)
藥物在放置過程中會發(fā)生降解，而影響因素試驗(yàn)就是使藥物在一個(gè)劇烈的條件如高溫、光照等發(fā)生降解，考察藥物可能的降解產(chǎn)物，通過對降解產(chǎn)物的定性或定量，可以了解藥物的降解途徑。當(dāng)然，檢測和定量全部降解產(chǎn)物需要采用合適的分析方法，保證分離度、靈敏度等符合要求，這也是判斷有關(guān)物質(zhì)檢查方法可行性的依據(jù)，是其方法學(xué)研究中的重要組成部分之一。
以上系統(tǒng)分析了影響因素試驗(yàn)在處方工藝、質(zhì)量研究、上市時(shí)的包裝選擇和上市后的貯藏條件確定上所起的作用，希望大家根據(jù)研究目的，確定需要進(jìn)行的具體試驗(yàn)，全面分析，綜合判斷，獲取信息，保證藥品的質(zhì)量。但目前在審評過程中也經(jīng)常發(fā)現(xiàn)影響因素試驗(yàn)的設(shè)計(jì)、條件的設(shè)置等方面還存在著問題和不足，下面將舉例詳細(xì)說明。
2.2制劑影響因素試驗(yàn)存在問題的分析
如上所述，制劑的影響因素試驗(yàn)需綜合藥物的性質(zhì)、劑型、臨床特點(diǎn)等，采用具體問題具體分析的方法，確定具體試驗(yàn)項(xiàng)目、內(nèi)容和條件，而采用簡單照搬方法是工作中經(jīng)常犯錯(cuò)誤的原因之所在，下面將審評工作發(fā)現(xiàn)的常見問題歸納如下，希望在今后的研發(fā)工作中引起注意。
2.2.1考察指標(biāo)不全面
像性狀、有關(guān)物質(zhì)、含量測定等直接反映藥物變化或降解情況的一般考察指標(biāo)都會列入考察項(xiàng)目中，但與具體品種、具體劑型密切相關(guān)的關(guān)鍵指標(biāo)卻往往被忽視、被丟失，這是試驗(yàn)過程中經(jīng)常發(fā)生的事情，需引起充分關(guān)注。如粉針通常在臨床上需與輸液配伍使用，而對于溶解度低的主藥，不檢查配伍后不溶性微粒是否符合要求。當(dāng)與葡萄糖注射液進(jìn)行配伍試驗(yàn)時(shí)，未考察5一羥甲基糠醛的變化情況；易發(fā)生分子間、分子內(nèi)縮合的藥物如JB一內(nèi)酰胺類藥，未考察聚合物含量如何變化；在進(jìn)行低溫凍融試驗(yàn)時(shí)，難溶性藥物有可能析出，但未考察主藥析出后的溶解情況；考察濕度對固體制劑片劑、膠囊和顆粒等影響時(shí)，不提供吸濕增重?cái)?shù)據(jù)，從而不能了解水分的變化情況。
2.2.2試驗(yàn)條件的設(shè)置不合理
如乳膏等半固體制劑，指導(dǎo)原則中已經(jīng)明確說明宜采用30℃條件進(jìn)行試驗(yàn)，部分研發(fā)者仍采用常規(guī)的40℃條件，使乳膏劑有可能發(fā)生破乳，試驗(yàn)失去意義。
2.2.3試驗(yàn)過程中外界因素控制不嚴(yán)格
盡管在進(jìn)行一項(xiàng)影響因素試驗(yàn)時(shí)控制外界因素的干擾難度大，但為了反映和達(dá)到試驗(yàn)的目的，應(yīng)采取適當(dāng)?shù)拇胧ν饨绺蓴_因素進(jìn)行控制。而往往這方面考慮欠缺。如乳膏進(jìn)行光照試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)采取措施如冷藏和／或置密閉容器中，以確保物理狀態(tài)變化如蒸發(fā)、熔化所造成的影響最小。若不采取措施控制外界溫度，隨著光照時(shí)間的延長樣品的溫度升高，試驗(yàn)結(jié)果不能反映光照對藥物的影響。
2.2.4影響因素試驗(yàn)的種類設(shè)置不全面
影響因素試驗(yàn)的種類很多，不同的試驗(yàn)對保證藥品質(zhì)量都起著重要作用。如難溶性藥物制成溶液劑時(shí)未進(jìn)行低溫凍融試驗(yàn)，就不能保證上市后的穩(wěn)定性；采用半通透性材料制成的包裝容器盛裝液體時(shí)，不考察低濕條件下藥物的穩(wěn)定性，尤其是在變更包材的補(bǔ)充申請中常遇到的現(xiàn)象。非PVC多層共擠膜包裝、盛裝液體制劑的塑料瓶等，它們均是采用半通透性材料制成內(nèi)包裝，在穩(wěn)定性研究中不考察低濕條件下樣品的穩(wěn)定性，就不知道在低濕條件下水分是否透過容器發(fā)生丟失，主藥濃度是否變化。
2.2.5 已有國家標(biāo)準(zhǔn)藥品不進(jìn)行影響因素試驗(yàn)
由于難以獲悉已批準(zhǔn)上市藥品處方中輔料的具體種類和用量，因此申報(bào)品種的處方組成是否合理，工藝是否可行，如抗氧劑的保護(hù)程度，pH范圍的合理性等，均需通過影響因素試驗(yàn)進(jìn)行考察，判斷申報(bào)品種的處方工藝合理性。反之，不進(jìn)行影響因素試驗(yàn)將直接影響到已有國家標(biāo)準(zhǔn)藥品處方工藝的合理性。
3共性問題的討論
由于影響因素的種類很多，試驗(yàn)的設(shè)計(jì)也比較復(fù)雜，下面就影響因素試驗(yàn)中幾個(gè)比較關(guān)注的問題提出自己的考慮和認(rèn)識，僅供參考。
3.1 關(guān)于試驗(yàn)樣品包裝選擇的考慮
進(jìn)行影響因素試驗(yàn)時(shí)帶不帶包裝應(yīng)基于試驗(yàn)的目的。不帶內(nèi)包裝直接進(jìn)行影響因素試驗(yàn)是考察藥物固有的穩(wěn)定性，從而可以選擇合適的包裝材料和貯藏條件，同時(shí)篩選處方工藝的合理性；帶包裝是為了驗(yàn)證包裝對藥品的保護(hù)程度，證明所選擇包裝的合理性。
一般地，影響因素試驗(yàn)先采用不帶包裝進(jìn)行試驗(yàn)，但當(dāng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明樣品不穩(wěn)定時(shí)，那么，需采用包裝，包括內(nèi)包裝、外包裝，以說明所用包裝材料是否合適。如果帶包裝進(jìn)行影響因素試驗(yàn)時(shí)表明樣品仍不穩(wěn)定，那么，需重新選擇包裝材料，或重新篩選處方工藝。在進(jìn)行一項(xiàng)影響因素實(shí)驗(yàn)時(shí)，有時(shí)為了排除其他因素的干擾，需帶包裝進(jìn)行試驗(yàn)。例如，做注射劑的強(qiáng)光照射試驗(yàn)時(shí)，安瓿本身是透光的，可以不去除內(nèi)包裝，這樣還可以防止氧氣對藥物的破壞(有些注射劑是需充氮以增加穩(wěn)定性)，排除其他因素對試驗(yàn)的影響。同樣西林瓶也是透光的，只要讓樣品受到強(qiáng)光照射(如倒放，不帶標(biāo)簽)，也可不去除內(nèi)包裝?？傊瞿骋豁?xiàng)影響因素試驗(yàn)時(shí)，是否去除包裝，最終取決于試驗(yàn)的目的。
3.2關(guān)于配伍試驗(yàn)考察時(shí)間、取樣點(diǎn)及檢測指標(biāo)設(shè)置的考慮
部分制劑，像小針、粉針在臨床上需與其他輸液配伍后使用，配伍后藥物是否發(fā)生了沉淀、聚集等，是否發(fā)生了主藥與輸液之間的相互反應(yīng)，針對這些可能發(fā)生的情況，需進(jìn)行配伍試驗(yàn)，以考察藥物與輸液配伍后的穩(wěn)定性。
一般情況下，配伍試驗(yàn)需考察8 h內(nèi)樣品的穩(wěn)定性。取樣點(diǎn)的設(shè)置通常為0．5，1，2，4，6，8 h。如果樣品在4 h測定結(jié)果不穩(wěn)定，也就是發(fā)生了顯著變化，而2 h內(nèi)穩(wěn)定，那么必須在說明書上明確注明，樣品應(yīng)在配伍后2 h內(nèi)滴完，以保證藥物的穩(wěn)定性，保證臨床用藥的安全。
部分水針劑、粉針主藥含量很低，進(jìn)行配伍試驗(yàn)時(shí)，再稀釋到一定量溶媒中，含量更低，故建議采用檢測靈敏度較高的儀器進(jìn)行含量測定。而不進(jìn)行含量測定想通過其他指標(biāo)進(jìn)行控制含量是難以反映藥物質(zhì)量的變化，因?yàn)樵诜€(wěn)定性考察指標(biāo)中含量測定是非常重要的指標(biāo)，它直接反應(yīng)了藥品質(zhì)量的變化。
3.3 關(guān)于低溫和凍融試驗(yàn)的意義及兩者之間關(guān)系的認(rèn)識
藥品在運(yùn)輸、貯存或使用過程中可能會遇到較低的溫度，在這種條件下，藥品質(zhì)量一旦發(fā)生變化，直接影響到臨床用藥的安全性。因此，低溫試驗(yàn)、凍融試驗(yàn)就是考察藥物在較低溫度條件下的穩(wěn)定性，從而在運(yùn)輸、貯藏、使用過程中對外界條件的變化引起足夠的關(guān)注。例如，注射劑在較低的溫度下有可能引起析晶，那么就需要進(jìn)行低溫凍融試驗(yàn)，考察藥品在較低溫度下的穩(wěn)定性。進(jìn)行低溫試驗(yàn)或凍融試驗(yàn)主要是根據(jù)藥品在運(yùn)輸、貯存或使用過程中可能會遇到的溫度而確定。如果藥品在運(yùn)輸、貯存或使用過程中溫度的變化范圍在冰點(diǎn)以上，一般進(jìn)行低溫試驗(yàn)；如果藥品在運(yùn)輸、貯存或使用過程中溫度的變化范圍在冰點(diǎn)以下，一般進(jìn)行凍融試驗(yàn)。
3.4關(guān)于對溫度敏感藥物進(jìn)行影響因素試驗(yàn)的考慮
如果藥物在進(jìn)行高溫60，40℃影響因素試驗(yàn)時(shí)發(fā)生顯著變化，結(jié)果已經(jīng)表明，樣品對溫度敏感，那么，沒有必要再繼續(xù)降低溫度進(jìn)行影響因素試驗(yàn)，而在進(jìn)行加速試驗(yàn)時(shí)就應(yīng)該考慮在30℃或更低溫度條件下，長期試驗(yàn)也應(yīng)該選擇更低的溫度。
若申報(bào)生產(chǎn)已有國家標(biāo)準(zhǔn)藥品，已知藥物需在冰箱中4—8℃冷藏，這就表明藥物對溫度敏感，那么可不考察高溫如60℃或40℃對藥物穩(wěn)定性的影響。另外，基于影響因素試驗(yàn)作用的多樣性，如果為了考察分析方法的可行性，高溫試驗(yàn)也是方法學(xué)研究中的一部分。
3.5 關(guān)于高溫和高濕兩種試驗(yàn)設(shè)計(jì)的考慮
通常高溫包括60，40℃，高濕包括RH 75％，90％，如果高溫60℃，高濕RH 90％試驗(yàn)結(jié)果表明，樣品穩(wěn)定，那么不需要進(jìn)行低條件下的穩(wěn)定性試驗(yàn)；如果樣品發(fā)生顯著變化，那么需降低條件繼續(xù)考察。
如果通過檢索文獻(xiàn)資料或其他途徑，獲悉原料藥對高濕不穩(wěn)定，從而直接做了RH 75％的高濕試驗(yàn)，并且吸濕增重5％以上，那么，可以免做RH 90％高濕試驗(yàn)，因?yàn)閷?shí)驗(yàn)結(jié)果已經(jīng)表明，樣品對濕度不穩(wěn)定。
4小結(jié)
以上歸納和總結(jié)了影響因素試驗(yàn)的作用和種類，分析了目前申報(bào)資料中常見問題，討論了影響因素方面的共性問題，希望研發(fā)者認(rèn)識和重視影響因素試驗(yàn)在藥品研發(fā)過程的重要性，保證研發(fā)工作完整性和科學(xué)性，確保上市藥品質(zhì)量。
參看文獻(xiàn)（略）
摘自：《中國藥學(xué)雜志》，2008年1月第2期
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