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根據(jù)世界衛(wèi)生組織的最新統(tǒng)計，全球約有2.57億人感染乙型肝炎病毒（HBV）。慢性HBV感染會造成肝硬化和肝細(xì)胞癌（HCC）等嚴(yán)重健康問題。2015年，全球大約有88.7萬人死于HBV感染所致的并發(fā)癥。

大量研究表明，共價閉合環(huán)狀DNA（cccDNA）是慢性乙肝持續(xù)感染的元兇。作為病毒復(fù)制的中介，其在宿主肝細(xì)胞內(nèi)以微染色體的形式存在。不過，由于cccDNA在患者肝臟中的水平極低，傳統(tǒng)的分子生物學(xué)方法（如Southern blot）很難檢測。因此，目前急需一種更靈敏的檢測手段。

武漢大學(xué)中南醫(yī)院的研究人員近日利用微滴式數(shù)字PCR（ddPCR）技術(shù)，開發(fā)出一種新型的HBV檢測方法。它的優(yōu)勢在于能夠檢測血清、單細(xì)胞和組織樣本中的cccDNA。這項成果于4月12日發(fā)表在《The Journal of Molecular Diagnostics》上。

這項研究的負(fù)責(zé)人、武漢大學(xué)中南醫(yī)院基因診斷中心主任劉松梅博士談道：“肝細(xì)胞癌的發(fā)展與HBV密切相關(guān)。開發(fā)準(zhǔn)確而靈敏的cccDNA檢測方法具有重大的臨床意義。通過這種方法，越來越多的慢性乙肝患者將有望采用精確的治療方法來預(yù)防或延遲肝細(xì)胞癌的發(fā)生，而且可以在早期診斷癌癥。”

這種新型的檢測方法使用了Bio-Rad的微滴式數(shù)字PCR技術(shù)。利用ddPCR方法，研究人員能夠檢測到血清、單細(xì)胞和FFPE腫瘤組織中的cccDNA。與Southern blot及其他方法相比，檢測cccDNA的靈敏性提高。此外，傳統(tǒng)方法通常需要侵入性檢查，比如通過活檢獲取肝臟組織。

 “與肝臟活檢相比，血清可以通過非侵入性的方式獲得，已經(jīng)被廣泛用于臨床診斷。并且，血清中有著均勻的cccDNA分布，”劉松梅博士指出?！斑@種新的檢測方法也提高了cccDNA的檢測極限?！?/p>

研究人員發(fā)現(xiàn)，68例HCC患者中近90%為cccDNA陽性，而79例非HCC患者中只有53%為cccDNA陽性。HCC患者血清中的cccDNA拷貝數(shù)也高于非HCC患者。

cccDNA和HBV DNA的聯(lián)合分析能夠?qū)CC患者與非患者區(qū)分開?！斑@暗示cccDNA是HCC的風(fēng)險因素，”劉博士談道。

此外，研究人員能夠證實血清cccDNA水平與肝臟樣本中測得的cccDNA水平呈正相關(guān)。 “血清cccDNA確實是一種比肝內(nèi)cccDNA更好、更有用的診斷標(biāo)記，”劉博士總結(jié)說。

最近，一些靶向cccDNA的新型抗病毒策略可以改善HBV清除率。 因此，準(zhǔn)確而靈敏的cccDNA檢測方法對肝細(xì)胞癌的預(yù)測和早期診斷，靶向治療以及治療效果的評估有重要的臨床意義。