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【摘要】 介紹了目前常用脂質(zhì)體的兩大類制備方法：被動載藥法和主動載藥法，并對其優(yōu)缺點進行比較。被動載藥法適于脂溶性強的藥物，包封率高且不易泄露；而主動載藥法適于兩親性藥物。
【關(guān)鍵詞】 脂質(zhì)體； 被動載藥； 主動載藥
脂質(zhì)體作為藥物載體具有提高藥物療效、減輕藥物不良反應(yīng)及靶向作用的特點。三十多年來，人們就其制備方法進行了大量的研究。脂質(zhì)體是由磷脂分子在水相中通過疏水作用形成的，因此制備脂質(zhì)體所強調(diào)的不是膜組裝，而是如何形成適當(dāng)大小、包封率高和穩(wěn)定性高的囊泡。制備的方法不同，脂質(zhì)體的粒徑可從幾十納米到幾微米，并且結(jié)構(gòu)也不盡相同。目前，制備脂質(zhì)體的方法較多，常用的有薄膜法、反相蒸發(fā)法、溶劑注入法和復(fù)乳法等，這些方法一般稱為被動載藥法，而pH梯度法，硫酸銨梯度法一般被稱為主動載藥法。
1 被動載藥法
脂質(zhì)體常用制備方法主要有薄膜分散法、反相蒸發(fā)法、注入法、超聲波分散等。在制備含藥脂質(zhì)體時，首先將藥物溶于水相或有機相中，然后按適宜的方法制備含藥脂質(zhì)體，該法適于脂溶性強的藥物，所得脂質(zhì)體具有較高包封率。
1.1 薄膜分散法
此法最初由Bangham 等報道，是最原始但又是迄今為止最基本和應(yīng)用最廣泛的脂質(zhì)體的制備方法。將磷脂和膽固醇等類脂及脂溶性藥物溶于有機溶劑，然后將此溶液置于一大的圓底燒瓶中，再旋轉(zhuǎn)減壓蒸干，磷脂在燒瓶內(nèi)壁上會形成一層很薄的膜，然后加入一定量的緩沖溶液，充分振蕩燒瓶使脂質(zhì)膜水化脫落，即可得到脂質(zhì)體。這種方法對水溶性藥物可獲得較高的包封率，但是脂質(zhì)體粒徑在0.2～5 μm 之間，可通過超聲波儀處理或者通過擠壓使脂質(zhì)體通過固定粒徑的聚碳酸酯膜，在一定程度上降低脂質(zhì)體的粒徑。
1.2 超聲分散法
將磷脂、膽固醇和待包封藥物一起溶解于有機溶劑中，混合均勻后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)去除有機溶劑，將剩下的溶液再經(jīng)超聲波處理，分離即得脂質(zhì)體。超聲波法可分為兩種“水浴超聲波法和探針超聲波法”，本法是制備小脂質(zhì)體的常用方法，但是超聲波易引起藥物的降解問題。
1.3 冷凍干燥法
脂質(zhì)體混懸液在貯存期間易發(fā)生聚集、融合及藥物滲漏，且磷脂易氧化、水解，難以滿足藥物制劑穩(wěn)定性的要求。1978 年Vanleberghe 等首次報道采用冷凍干燥法提高脂質(zhì)體的貯存穩(wěn)定性。目前，該法已成為較有前途的改善脂質(zhì)體制劑長期穩(wěn)定性的方法之一。
脂質(zhì)體冷凍干燥包括預(yù)凍、初步干燥及二次干燥 3 個過程。凍干脂質(zhì)體可直接作為固體劑型，如噴霧劑使用，也可用水或其它溶劑化重建成脂質(zhì)體混懸液使用，但預(yù)凍、干燥和復(fù)水等過程均不利于脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定。如在凍干前加入適宜的凍干保護劑，采用適當(dāng)?shù)墓に嚕瑒t可大大減輕甚至消除凍干過程對脂質(zhì)體的破壞，復(fù)水后脂質(zhì)體的形態(tài)、粒徑及包封率等均無顯著變化。單糖、二糖、寡聚糖、多糖、多元醇及其他水溶性高分子物質(zhì)都可以用做脂質(zhì)體凍干保護劑，其中二糖是研究最多也是最有效的，常用的有海藻糖、麥芽糖、蔗糖及乳糖。本法適于熱敏型藥物前體脂質(zhì)體的制備，但成本較高。陳建明等［1］以大豆磷脂為膜材，以甘露醇為凍干保護劑，采用凍干法制備了維生素A前體脂質(zhì)體，復(fù)水化后平均粒徑為 0.615 1 μm ，包封率 98.5%。林中方等［2］采用凍干法制備了鬼臼毒素體脂質(zhì)體，復(fù)水化后平均粒徑為 1.451 μm ，包封率 72.3%，但是這種方法仍然存在著不足之處，例如脂質(zhì)體復(fù)水化后粒徑分布不夠均勻。
1.4 凍融法
此法首先制備包封有藥物的脂質(zhì)體，然后冷凍。在快速冷凍過程中，由于冰晶的形成，使形成的脂質(zhì)體膜破裂，冰晶的片層與破碎的膜同時存在，此狀態(tài)不穩(wěn)定，在緩慢融化過程中，暴露出的脂膜互相融合重新形成脂質(zhì)體。何文等［3］分別用反相蒸發(fā)法、乳化法和凍融法制備了甲氧沙林脂質(zhì)體。通過研究發(fā)現(xiàn)，凍融法制備的脂質(zhì)體的包封率最高，但是粒徑最大。反復(fù)凍融可以提高脂質(zhì)體的包封率，王健松［4］制備了阿奇霉素脂質(zhì)體，實驗發(fā)現(xiàn)，經(jīng)3次重復(fù)凍融后，阿奇霉素脂質(zhì)體的包封率從61.4% 增加到78%，但是當(dāng)凍融次數(shù)增加到4次，包封率變化很小。該制備方法適于較大量的生產(chǎn)，尤其對不穩(wěn)定的藥物最適合。
1.5 復(fù)乳法
此法第1步將磷脂溶于有機溶劑，加入待包封藥物的溶液，乳化得到W/O 初乳，第2步將初乳加入到10倍體積的水中混合，乳化得到W/O/W乳液，然后在一定溫度下去除有機溶劑即可得到脂質(zhì)體。Kim［5］用乳化法制得脂質(zhì)體的包封率比較高，但是粒徑較大。Tomoko等［６］通過研究發(fā)現(xiàn)，第2步乳化過程和有機溶劑的去除過程的溫度對脂質(zhì)體的粒徑有比較大的影響，較低的溫度有利于減小脂質(zhì)體的粒徑，通過控制溫度可以制得粒徑為400 nm，包封率達到 90%的脂質(zhì)體。
1.6 注入法
將類脂質(zhì)和脂溶性藥物溶于有機溶劑中（油相），然后把油相均速注射到水相（含水溶性藥物）中，攪拌揮盡有機溶劑，再乳勻或超聲得到脂質(zhì)體。根據(jù)溶劑的不同可分為乙醇注入法和乙醚注入法。
乙醇注入法避免了使用有機溶劑，丁麗燕［5］用乙醇法制備了司帕沙星脂質(zhì)體，通過研究發(fā)現(xiàn)慢速注入可制得具有較高包封率的脂質(zhì)體，其包封率為47%。
乙醚注入法制備的脂質(zhì)體大多為單室脂質(zhì)體，粒徑絕大多數(shù)在2 μm以下，操作過程中溫度比較低（40℃），因此，該方法適用于在乙醚中有較好溶解度和對熱不穩(wěn)定藥物，同時通過調(diào)節(jié)乙醚中不同磷脂的濃度，可以得到不同粒徑且粒徑分布均勻的脂質(zhì)體混懸液［8］。
1.7 反相蒸發(fā)法
最初由Szoka提出，一般的制法是將磷脂等膜材溶于有機溶劑中，短時超聲振蕩，直至形成穩(wěn)定的W/O乳液，然后減壓蒸發(fā)除掉有機溶劑，達到膠態(tài)后，滴加緩沖液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)使器壁上的凝膠脫落，然后在減壓下繼續(xù)蒸發(fā)，制得水性混懸液，除去未包入的藥物，即得大單層脂質(zhì)體脂質(zhì)體。此法可包裹較大的水容積，一般適用于包封水溶性藥物、大分子生物活性物質(zhì)等。
1.8 超臨界法
傳統(tǒng)的脂質(zhì)體制備方法，必須要使用氯仿，乙醚、甲醇等有機溶劑，這對環(huán)境和人體都是有害的。超臨界二氧化碳是一種無毒、惰性且對環(huán)境無害的反應(yīng)介質(zhì)。嚴(yán)賓等［9］用超臨界法制備了頭孢唑林鈉脂質(zhì)體，將一定量的卵磷脂溶解于乙醇中配得卵磷酯乙醇溶液，與頭孢唑啉鈉溶液一起放入加入高壓釜中，將高壓釜放入恒溫水浴中，通入CO2。在其超臨界態(tài)下孵化30min，制備脂質(zhì)體。采用超臨界CO2法制備的包封率高、粒徑小，穩(wěn)定性增強。
2 主動載藥
對于兩親性藥物，如某些弱酸弱堿，其油水分配系數(shù)介質(zhì)pH和離子強度的影響較大，用被動載藥法制得的脂質(zhì)體包封率低。
主動載藥是利用兩親性的藥物，能以電中性的形式跨越脂質(zhì)雙層，但其電離形式卻不能跨越的原理來實現(xiàn)的。通過形成脂質(zhì)體膜內(nèi)、外水相的pH梯度差異，使脂質(zhì)體外水相的藥物自發(fā)地向脂質(zhì)體內(nèi)部聚集。
此法通常用脂質(zhì)體包封酸性緩沖鹽，然后用堿把外水相調(diào)成中性，建立脂質(zhì)體內(nèi)外的pH 梯度。藥物在外水相的pH環(huán)境下以親脂性的中性形式存在，能夠透過脂質(zhì)體雙層膜。而在脂質(zhì)體內(nèi)水相中藥物被質(zhì)子化轉(zhuǎn)為離子形式，不能再通過脂質(zhì)體雙層回到外水相，因而被包封在脂質(zhì)體中。主動載藥法廣義上就是指pH 梯度法。人們把其細分為：（1）pH梯度法；（2）硫酸銨梯度法；（3）醋酸鈣梯度法。其中硫酸銨梯度法和醋酸鈣梯度法只是pH梯度法的兩種特殊形式。
2.1 pH梯度法
pH梯度法通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)體內(nèi)外水相的pH值，形成一定的pH梯度差，弱酸或弱堿藥物則順著pH梯度，以分子形式跨越磷脂膜而使以離子形式被包封在內(nèi)水相中。
趙妍等［10］用以pH梯度法制備硫酸長春新堿脂質(zhì)體，其包封率大于85%，而被動載藥法制備的硫酸長春新堿脂質(zhì)體的包封率最高為14.4%。Jia等［11］用pH梯度法內(nèi)水相pH 0.5%外水相pH4.0制備了卡苯達唑脂質(zhì)體，包封率高于95%。杜松等［12］用pH梯度法制備鹽酸去氫駱駝蓬堿脂質(zhì)體，包封率大于80%，研究表明，雖然制得的脂質(zhì)體沒有加強藥物的抗癌活性，但是大大降低了其毒副作用。
跨膜pH梯度是影響包封率的最主要因素，通常pH梯度越大，載入脂質(zhì)體內(nèi)的藥物越多，包封率也越高。制備伊立替康脂質(zhì)體時［13］，當(dāng)pH梯度≥3.7時包封率達97%以上，當(dāng)pH梯度＜2時，包封率不到5%；Mamyer等［14］在研究中發(fā)現(xiàn)通過跨膜pH梯度法制備多柔比星脂質(zhì)體，pH梯度達到3.5時包封率達98%，降低內(nèi)水相緩沖液的pH可增大pH梯度，但會加劇磷脂的水解，降低脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。
此外，藥物自身性質(zhì)如油水分配系數(shù)、膜滲透性等亦可影響包封率。Quan等［15］用pH梯度法制備多巴胺脂質(zhì)體，由于多巴胺親水性較強，無法直接克服能量壁壘穿過脂質(zhì)雙分子層進入內(nèi)水相，但與拉沙洛西（lasalocid)結(jié)合形成復(fù)合物可暴露出親脂性表面，即可穿過脂質(zhì)膜進入脂質(zhì)體，包封率提高到85%。氧化苦參堿水溶性較大，脂溶性較弱，因此采用pH梯度法制備脂質(zhì)體包封率只有50%［16］。
2.2 硫酸銨梯度法
硫酸銨梯度法通過游離氨擴散到脂質(zhì)體外，間接形成pH梯度，使藥物積聚到脂質(zhì)體內(nèi)。其方法為先將硫酸銨包與脂質(zhì)體內(nèi)水相，然后通過透析、凝膠色譜或超濾的方法除去脂質(zhì)體外水相的硫酸銨。由于離子對雙分子層滲透系數(shù)的不同，氨分子滲透系數(shù)（0.13 cm/s）較高，能很快擴散到外水相中；H+的滲透系數(shù)遠小于氨分子，因此會使脂質(zhì)體內(nèi)水相呈酸性，形成pH梯度，梯度大小由［NH4+］外水相/［NH4+］內(nèi)水相比較決定，這樣使藥物逆硫酸銨梯度載入脂質(zhì)體。藥物與SO42-形成的硫酸鹽，對雙分子層有很低滲透系數(shù)，因而使藥物具有很高的包封率。
劉陶世等［17］采用硫酸銨梯度法制備馬錢子堿脂質(zhì)體 ，0.1 mol/L硫酸銨水溶液的用量為大豆卵磷脂的66.7倍，制得的馬錢子堿脂質(zhì)體包封率在90%以上。米托恩醌以注入法或反相蒸 發(fā)法制備的脂質(zhì)體，包封率較低，但是其為弱堿性蒽醌類藥物，易與硫酸根離子形成溶解性更小的硫酸鹽，黃園［18］用硫酸銨梯度法制備米托蒽醌脂質(zhì)體的平均粒徑均在60 nm左右，包封率為93.65%。Pan 等［19］用不同的主動載藥法制備了5種多銨硼酸鹽脂質(zhì)體，得到較高的包封率僅為6%和15%。研究表明，用硫酸銨梯度法制備的脂質(zhì)體包封率要高于枸櫞酸鹽pH梯度法制得的脂質(zhì)體。Wong等［20］用此法制備了環(huán)丙沙星單室脂質(zhì)體，包封率為90%。
相比較于pH梯度法，硫酸銨梯度法不需要改變外水相的pH值，控制梯度也易實現(xiàn)，整個過程無需緩沖液或pH滴定，內(nèi)水相只有pH梯度法更有利于脂質(zhì)體的穩(wěn)定。
2.3 醋酸鈣梯度法
醋酸鈣梯度法通過醋酸鈣的跨膜運動產(chǎn)生的醋酸鈣濃度梯度（內(nèi)部的濃度高于外部），使得大量質(zhì)子從脂質(zhì)體內(nèi)部轉(zhuǎn)運到外部產(chǎn)生pH梯度。醋酸的滲透參數(shù)（6.6×10-4cm·s-1)比Ca2+（2.5×10-11cm·s-1）大7個數(shù)量級，所以很少穿越雙分子膜留在脂質(zhì)體內(nèi)部，醋酸分子則參與了質(zhì)子轉(zhuǎn)運。醋酸鈣跨膜運動產(chǎn)生的濃度梯度（內(nèi)部的濃度高于外部）導(dǎo)致大量質(zhì)子從脂質(zhì)體的內(nèi)部轉(zhuǎn)運到外部產(chǎn)生pH梯度，而pH的不平衡為包載和聚集弱堿藥物提供了高效驅(qū)動力。因此，在這基礎(chǔ)上應(yīng)用醋酸鈣梯度法把弱酸藥物萘啶酸包載入預(yù)制備好的空白脂質(zhì)體中［21］，包封率約99%，在4℃下存放10個月均穩(wěn)定未見泄露。Hwang等［22］也用此法制備了雙氯芬酸鈉脂質(zhì)體，包封率約100%，而傳統(tǒng)的逆相蒸發(fā)法只有1%～8%。
3 結(jié)語
脂質(zhì)體作為一種新型的藥物傳遞系統(tǒng)正越來越被人們重視。評價脂質(zhì)體質(zhì)量的指標(biāo)有外觀、粒徑分布和包封率等，其中包封率是衡量脂質(zhì)體內(nèi)在質(zhì)量的一個重要指標(biāo)。制備方法的不同，脂質(zhì)體的粒徑、結(jié)構(gòu)以及包封率都不盡相同。被動載藥法適于脂溶性的藥物，包封率高且不易泄露。而主動載藥法適于兩親性藥物，其包封率一般＞80%，開啟了制備高包封率水溶性藥物脂質(zhì)體的新思路。
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